土壤生态修复相关酶指标测定.doc

文档介绍：土壤生物化学指标测定
土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定(比色法)
分析意义脱氢酶能酶促脱氢反应,它起着氢的中间传递体的作用。在土壤中,碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃,他们可以作为氢的工体。脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。
方法选择与原理 Lenhard(1956)最先提出用TTC作为氢的受体生成红色的TF,进行闭塞测定,以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法做了不同的改进和完善。用土壤有机质作为氢的供体或用葡萄糖做氢的供体,用生成的TF数量或换算成氢的体积来表示脱氢酶的活性。
试剂配制
1、%TTC溶液
2、甲苯
3、Tris-:***氨基甲烷()50ml ,用水稀释至100ml。
4、硫化钠
5、。
(四)实验步骤
1、标准曲线的绘制:称取相当于50mg纯品量的已烘干的TTC于50 ml比色管中,定容,制成1 mg/L的母液。、、、、、 mg/ml标准 TTC溶液,用蒸馏水定容至5mL。
在试管中依次加入2 mL Tris-HCl缓冲液,2mL蒸馏水,2mL TTC系列溶液,对照组不加TTC,再各加入1 g低亚硫酸钠,摇匀,待溶液充分显色后,各管准确加入5ml甲苯,振荡萃取2min,取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞绘制标准曲线。
2、操作过程:取1g新鲜土壤,置于50ml 比色管中,依次加入4mlTris-HCl盐酸缓冲液、2ml 、1ml % TTC溶液,震荡均匀,离心(4000转/分)5分钟后,将甲苯提取液在分光光度计492 nm处闭塞测定。同时设无土壤和无TTC的对照(以蒸馏水替代)。
3、结果计算:脱氢酶活性=TF含量/ —土壤含水量
脱氢酶活性,以24h后1g干土中 TF的生成量表示。
过氧化氢酶(Catalase activity)活性测定(滴定法)
1. 试剂配制
%过氧化氢溶液100mL:取1mL30%的过氧化氢溶液,在100mL容量瓶中定溶至100mL即可。
3N硫酸。
:,稀释至500mL,。
2. 操作步骤
取2g土壤样品,置于100mL三角瓶中,%过氧化氢溶液。将三角瓶放在摇床上,振荡20min。而后加入5mL 3N硫酸,以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。然后,吸取25mL滤液,,所消耗的高锰酸钾量(mL数)记为B;另取一管不加土样作对照,按上述方法操作,即滴定25mL原始的过氧化氢混合液,所消耗的高锰酸钾量(mL数)记为A。
3. 结果计算
以20min
性。即A-B为过氧化氢酶活性。单位:mg KMnO4·g-1·min-1。
土壤脲酶(urease)活性的测定(比色法)
(一)分析意义脲酶广泛存在于土壤中,是研究的比较深入的一种土壤酶。脲酶