文档介绍：鸡新城疫抗体检测(微量法) 血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
2017/11/20
主要内容
一、实验目的
二、实验内容
三、实验原理
四、实验材料
五、实验方法与结果判定
六、注意事项
七、新城疫背景介绍
2017/11/20
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法;
2、了解新城疫有关背景知识。
2017/11/20
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原;
2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体。
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三、实验原理
1、血凝试验(HA)原理:某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝(HA),也称直接血凝反应。
病毒颗粒
红细胞
2017/11/20
2、血凝抑制试验(HI)原理:当病毒的悬液中加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制(HI)反应,也称血凝抑制反应。
I am late!
抗体
抗原
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四、实验材料
1、血凝板(2人/块);
2、新城疫标准抗原、阳性血清;
3、被检血清(1份);
4、1%红细胞悬液;
5、稀释液;
6、移液器(10~100ul, 2人/把);
7、枪头;
8、%枸橼酸钠溶液、阿氏液;
9、5ml注射器一支/人。
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五、实验方法与结果判定
血凝试验(HA)
1、在血凝板上第一排的1~12孔内各加入25ul生理盐水;
2、在第1孔内加入25ul病毒标准抗原,然后依次倍比稀释至第11孔,最后弃25ul;
3、每孔加入1%鸡红细胞悬液25ul ;
4、轻轻振荡均匀,后放于室温或37℃中静置30min;
5、结果判定。
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孔
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
2
×
4
×
8
×
16 ×
32
×
64 ×
128
×
256 ×
512×
1024 ×
2048
×
红细胞对照
生理
盐水
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
抗原
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
红细胞
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
结
果
++++
++++
++++
+++ +
++ + +
+ + +
+ +
+
-
-
-
-
血凝效价测定
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结果判定标准
1、++++:红细胞呈细沙样均匀铺于孔底,即100%凝集;
2、+++:红细胞均匀铺于孔底,当边缘不整齐而稍向孔底集中,即75%凝集;
3、++ :红细胞形成一个环状,四周有凝集块,即50%凝集;
4、+ :红细胞于孔底形成圆团,边缘不够光滑,四周稍有凝集块,即25%凝集;
5、- :红细胞于孔底形成圆团,边缘光滑整齐,即无凝集;
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