发酵分析—高效液相色谱技术.ppt

文档介绍：高效液相色谱技术(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)
高效液相色谱法
它是在经典液相色谱实验基础上,引入气相色谱的理论。
以液体作为流动相的色谱法。
在技术上采用高压输液泵,高效固定相和高灵敏的检测器,而发展起来的快速分离分析技术。
HPLC和经典液相色谱法的比较
高效液相色谱法
经典液相色谱法
色谱柱柱长/cm
10~25
10~200
色谱柱柱内径/mm
2~10(不锈钢管)
10~50(玻璃管)
固定相粒度(粒径μm)
3~50
75~600
流动相流动方式
高压输液泵压入
靠重力流入
溶液的传质、扩散速度
快
缓慢
色谱柱入口压力/MPa
2 ~20
~
色谱柱柱效/(理论塔板数/m)
2*103 ~ 5*104
2 ~ 50
进样量/(g)
10-6 ~ 10-2
1~10
分析时间/h
~
1 ~ 20
HPLC vs GC
分析对象
流动相
工作条件
气相色谱法
气体和沸点较低的化合物,仅占有机物总数的20%
惰性气体
温度较高
高效液相色谱法
高极性、高分子量、离子型的物质,占有机物总数近80%
液体
可在室温下工作
特点:高压、高效、高速、高灵敏
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
LC<>GC 互补性
高效液相色谱法的特点
(1)分离效能高:柱效可达5000~30000块/米
(2)选择性高:通过流动相的控制来改善分离过程的选择性
(3)检测灵敏度高:
UV—最小检出量可以达到10-9 g
FD--最小检出量可以达到10-12 g
(4)分析速度快:采用了高压泵
HPLC
液-固吸附
液-液分配
正相色谱
反相色谱
一般反相色谱
离子对色谱
离子抑制色谱
离子交换色谱
一般离子交换色谱
离子色谱
氨基酸分析
空间排斥色谱
凝胶渗透色谱
凝胶过滤色谱
假相色谱
胶束色谱
环糊精色谱
亲合色谱,手性色谱,毛细管电泳
结构流程
高效液相色谱仪
高压输液系统:储液罐、吸滤器、高压
输液泵、脱气装置及梯度洗脱装置
进样系统:进样器,进样阀
分离系统:色谱柱,恒温箱
检测系统:检测器
记录系统:记录装置、色谱工作站
色谱柱
进样阀
流
动
相
检测器
高压泵
脱气装置