酱油 大肠菌群的测定 乳糖发酵法.pdf

文档介绍：FSPTWPJY011 酱油大肠菌群的测定乳糖发酵法

F_SP_TWP_JY_011
酱油—大肠菌群的测定—乳糖发酵法

1 范围
本方法采用乳糖发酵法测定酱油中大肠菌群的 MPN 值。
本方法适用于酱油中大肠菌群的测定,以 MPN/100mL 报告其结果。
2 原理
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有
否污染肠道致病菌的可能。
3 试剂
溴甲酚紫溶液,
乳糖胆盐发酵管:将蛋白胨 20g、猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g 及乳糖 10g 溶于 1000 mL
水中,校正 PH 至 ,加入溴甲酚紫溶液 25mL,混匀后分装每管 10mL,并放入一个小倒管,
115℃高压灭菌 15min。
双料乳糖胆盐发酵管:将蛋白胨 40g、猪胆盐(或牛、羊胆盐)10g 及乳糖 20g 溶于 1000
mL 水中,校正 PH 至 ,加入溴甲酚紫溶液 50mL,混匀后分装每管 10mL,并放入一个小
倒管,115℃高压灭菌 15min。
乳糖发酵管:将蛋白胨 20g 及乳糖 10g 溶于 1000 mL 水中,校正 PH 至 ,加入溴甲
酚紫溶液 25mL,混匀后按检验要求分装 30 mL 、10mL、3 mL,并放入一个小倒管,115℃
高压灭菌 15min。
EC 肉汤:将胰蛋白胨 20g、3 号胆盐(或混合胆盐)、乳糖 5g、磷酸氢二钾 4g、磷
酸二氢钾 及氯化钠 5g 混合,溶于 1000 mL 水中,溶解后分装有发酵倒管的试管中,并
放入一个小倒管,121℃高压灭菌 15min,最终 PH 为 ±。
伊红美蓝琼脂平板:将蛋白胨 10g、磷酸氢二钾 2g 及琼脂 17g 溶解于蒸馏水中, 校正 PH
至 分装于烧瓶内,121℃高压灭菌 15min,临用时加入乳糖 10g 并加热溶化琼脂,冷至 50~
55℃,加入伊红美蓝溶液()10 mL,摇匀,倾注平板。
革兰氏染色液:
结晶紫染色液:将 1g 结晶紫溶解于 20 mL 乙醇(950g/L)中,然后与 80 mL 草酸铵溶
液(10 g/L)混合均匀。
革兰氏碘液:将 1g 碘与 2g 碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶
解后,再加蒸馏水至 300mL。
沙黄复染液:将 沙黄溶解于 10 mL 乙醇(950g/L)中,然后用蒸馏水稀释至 100mL。
4 仪器
温箱:36±1℃
恒温水浴:±℃
显微镜
5 操作步骤
样品处理:用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌,用石碳酸纱布盖好,再用灭菌开瓶器启开
后进行检验。
检样稀释:以无菌操作,吸取酱油样品 25 mL,加入装有 225mL 灭菌蒸馏水的灭菌玻璃
瓶内经充分振摇做成 1:10 的均匀稀释液。
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量分别为 10mL 、1mL、