文档介绍：FSPYL028 饮料沙门氏菌的检验平板观察法

F_SPYL028
饮料—沙门氏菌的检验—平板观察法

1 范围
本方法适用于饮料中沙门氏菌的检验。
2 原理
饮料样品处理后,经前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定、血清分型判定沙门氏
菌型,报告结果。
3 试剂
缓冲蛋白胨水(BP)
成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4· 12H2O) 9g
磷酸二氢钾
蒸馏水 1000mL

制法
按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌 15min。临用时无菌分装,每
瓶 225mL。
氯化镁孔雀绿(MM)增菌液
甲液
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾
蒸馏水 1000mL
乙液
氯化镁 40g
蒸馏水 100mL
丙液
%孔雀绿水溶液。
制法
分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌 15 min 备用。临用时取甲液 90mL、
乙液 9mL、丙液、以无菌操作混合即可。
四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液
基础培养基
多胨或月示胨 5g
胆盐 l g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000mL
碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
1
蒸馏水 20mL
制法
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶 100mL。分装时应
随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌 15min 备用。临用时每 100mL 基
础培养基中加入碘溶液 2mL、%煌绿溶液 1mL。
亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液
成分
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
L-胱氨酸
蒸馏水 1000mL
1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法
称取 L-胱氨酸 (或 DL-胱氨酸 ),加 1mol/ L 氢氧化钠 ,使溶解,
再加入蒸馏水即成。
制法
将除亚硒酸氢钠和 L-胱氨酸以外的各成分溶解于 900mL 水中,加热煮沸,俟冷
备用。另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 蒸馏水中,加热煮沸,俟冷,以无菌操作与上
液混合。再加入 1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液 1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶 100mL,
pH 应为 ±。
亚硫酸铋琼脂(BS)
成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁
磷酸氢二钠 4g
煌绿
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
制法
将前面 5 种成分溶解于 300mL 蒸馏水中。
将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50mL 蒸馏水溶解。
将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解,冷至 80℃。
将以上三液合并,补充蒸馏水至 1000mL,校正 ,加 %煌绿水溶液 5mL,
摇匀。冷至 50~55℃,倾注平皿。
注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热, 以免降低其选择性。应在临用前
一天制备,贮存于室温暗处。
DHL 琼脂
成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
2
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧胆酸钠 1g
硫代硫酸钠
柠檬酸钠 1g
柠檬酸铁铵 1g
中性红
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
制法
将除中性红和琼脂以外的成分溶解于 400mL 蒸馏水中,校正。再将琼脂于
600mL 蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入 %中性红水溶液 6mL,待冷至 50~
55℃,倾注平板。
HE 琼脂
成分
月示胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨素 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
% 溴麝香草酚蓝溶液 16mL
Andrade