文档介绍：动物生理学实验
2017/11/23
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实验一
白细胞的计数
思考题
注意事项
方法步骤
材料设备
基本原理
实验目的
【实验目的】
了解白细胞计数原理,学****其测定方法。
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【基本原理】
白细胞简介
白细胞是血液中非常重要的一类细胞,通常被称为免疫细胞,存在于血液、淋巴及血管、淋巴管以外的组织中。白细胞在人体中担负许多重任,它具有吞噬异物并产生抗体的作用,机体伤病的损伤治愈能力,抗御病原体入侵的能力,对疾病的免疫抵抗力等。人身体有不适时,经常会通过白细胞数量的显著变化而表现出来。因此到医院看病很多情况下需要化验血常规,血常规检查中最多用途的就是白细胞计数和分类。
正常值范围:(单位为10个/L)
新生儿为(15-20)× 109个/L
6个月到2岁为(11-12)× 109个/L
4到14岁为8× 109个/L
***为(-)×109个/L
临床意义:
增多:常见于急性细菌性感染、严重组织损伤、大出血、中毒和白血病等。
减少:镇痛药、磺***类药的服用;病毒感染;免疫系统衰弱;放化疗的影响。
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实验原理
用特制的微量吸管吸取一定量的血液,经稀释后置于血细胞计数板的计数室内,在显微镜下计数一定体积的血细胞数,再将所得的结果换算成每mm2或1L血液内的血细胞数。在医学临床上已使用血细胞分析仪使血细胞计数工作自动化。
血细胞计数板
血细胞分析仪
【方法步骤】
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1、采血和稀释
;
用酒精棉球消毒采血部位,干燥后,用消毒过的采血针刺破皮肤,使血液流出;
第一滴血用干棉球拭去不要,当第二滴血积聚较多时,用微量毛细吸血管准确吸取血液20μL,擦净管外粘附的血液,然后将血液轻轻吹入盛有稀释液的试管底部,并用上清液清洗吸血管2~3次,轻轻摇动试管使血液与稀释液充分混匀。
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2、血细胞计数板的构造
计数板为一长方形厚玻璃板,中间有四条平行槽沟,在中间的两条槽沟之间,有一条横槽沟,使其构成两个长方形的平台;
,当放上一块盖玻片后,;
两平台中心部分各有一个计数室,划分为9个大方格,每个大方格面积为1mm2,,四角的大方格又分为16个中方格,用于白细胞计数。
计数室只能用自来水和蒸馏水相继冲洗,然后用丝绢轻轻拭净,不能用酒精和***洗涤。洗净后在低倍镜下熟悉计数室的构造。
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血细胞计数板的计数室放大图
【方法步骤】
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3、计数方法
将计数室上的盖玻片放妥并置于显微镜上,用洁净的玻璃棒蘸取少量已稀释并混匀的血细胞悬液,在计数室和盖玻片交界处一次性滴入计数室,使之灌满,滴入计数室的血细胞悬液不得过多或过少;
静置2~3min待血细胞下沉;
在低倍镜下检查白细胞分布是否均匀,
之后计数计数室四角的4个大方格中所有的白细胞总数。
注意:显微镜的载物台应绝对平置,不能倾斜,以免血细胞一边集中。光线不必过强。
【方法步骤】
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4、计算
,血液被稀释20倍。共计数4个大方格的白细胞总数,一个大方格的容积,,;
白细胞数/mm3=4个大方格的细胞总数÷×20。
1 L=1×106mm3
正常值范围:
***为(~)×109个/L
【注意事项】
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采血部位消毒后,涂一层凡士林可以使血液成滴便于吸收。
吸血时将吸管下端开口放入血液中部,尽量利用毛细管现象使血液自动进入吸管内。血液加入试管后,须充分摇匀,动作要轻,避免出现气泡和破坏血细胞。
细胞悬液滴入计数室的液量要适当。过多则混悬液溢出并流入两侧深槽内,使盖玻片浮起,导致计数不准。滴入量过少则不能充满计数室,反复充液可能造成计数室内有气泡,影响计数室体积,此时应洗净计数板,干燥后重做。
计数室内细胞分布要均匀。如果发现各大格的白细胞数目相差8个以上,表示血细胞分布不均匀,应重做。
所用吸管、试管、计数板等必须十分干净,各种稀释液严防混入杂质或有细菌生长。计数板等用过之后,必须立即洗涤干净。