文档介绍：梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验(TPPA)简介
聂明明
梅毒概况
梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播疾病。人体受感染后,螺旋体很快播散到全身,几乎可侵犯全身各组织与器官,临床表现多种多样,且时显时隐,病程较长
≪中华人民共和国传染病防治法≫规定要管理的性病是爱滋病、淋病和梅毒,应加以重点防治。卫生部≪性病防治管理办法≫则规定除上述3种病以外,还有生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性尿道炎(NGU)、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病
梅毒早期主要侵犯皮肤及粘膜,晚期除侵犯皮肤、粘膜外,还可侵犯心脏血管系统及中枢神经系统;另一方面,梅毒又可多年无症状呈潜伏状态
梅毒主要通过性接触传染,也可因其它方式密切接触或输入患者的血液而传染。梅毒孕妇可通过胎盘使胎儿在宫内受感染或出生时接触母亲有病损的产道受染
梅毒与HIV感染
梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关,从社会学角度来看,凡人群中梅毒发病率高,意味着人群中性乱现象严重,提供了艾滋病流行的条件;从医学角度来说,患有梅毒的人,因有局部溃疡,可明显增加带有CD4受体信息的目标细胞,故对HIV感染的易感性增加2-10倍。同样,HIV感染者伴有梅毒,其生殖道排出的HIV的量要比仅有HIV感染者排出的量大得多
在HIV感染者中,梅毒血清学反应有时会出现难于解释的现象,因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表现为阴性者,建议考虑HIV检查
梅毒的血清学试验(一)
非梅毒螺旋体抗原血清试验:是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素,用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试验,原理基本相同:
1、性病研究实验室玻片试验(VDRL) :由于试剂需现配现用,故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法
2、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR):在特制的纸片
上进行,加入一定量特制的炭粉,可使抗原抗体出现
凝集,用肉眼可观察结果。
3、甲苯胺红试验(TRUST):在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉颗粒,使结果更易于观察。
4、不加热血清反应素试验(USR)
梅毒的血清学试验(二)
梅毒螺旋体抗原血清试验:用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体,其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法:
1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)
2、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)
3、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)
4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)
5、梅毒螺旋体快速诊断试验(TP-RT)
TPPA
原理: Pallidum(Nichols株)的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum(TP)抗体进行反应发生凝集,产生粒子凝集反应(Particle Agglutination Test;PA法),由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum(TP)抗体,并且可用来测定抗体效价。
优点: 1、试剂稳定,批间差小
2、结果判读更为清晰明确
3、敏感性和特异性较TPHA进一步提高
4、通过了国家的批批检
不足:结果判定主观,较难实现自动化
关于梅毒血清学试验程序的探讨(一)
先以非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR、TRUST等)进行初筛,再以梅毒螺旋体抗原血清试验(TPPA、TPHA、ELISA等)进行确认
优点:非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉,使梅
毒检测的成本可以保持在低水平
缺点:非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差,
导致临床上易出现漏检的情况
同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验
优点:这是从技术上而言的最佳方案
缺点:人力和试剂成本较高
先进行梅毒螺旋体抗原血清试验,阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试验
样本要求
样品中如果存在红细胞等其他有形成分,会给反应带来不便,所以应在离心除去之后再进行检查。
血清样品即使钝化也不会影响检查结果。
TPPA操作中的注意事项
不要将生产批号不同的试剂混合在一起使用
试剂应2-8 ℃保存,不可冻结试剂
试剂在使用前应事先从冰箱中取出, 平衡至室温后再进行操作
试验应在FASTEC硬质微量反应U型板中进行, 该板洗涤后可重复使用, 但重复使用次数不宜超过三次
最好将反应板放置在一块白色湿布上进行加样、稀释过程,以防止静电可能带来的影响
致敏粒子和未致敏粒子在滴加前应充分摇匀。加样、稀释完毕后应轻轻拍打反应板边缘以进行混匀,注意勿使液体溅入邻近的孔中,不要使用旋涡混匀器
反应应在室温下静置2小时以上,不要使用水浴箱或恒温箱,结果观察完毕前不要振