酶联免疫ELISA.ppt

文档介绍：酶联免疫吸附试验ELISA
郝丹
1. ELISA的原理
2. ELISA的类型
3. ELISA的具体操作
主要内容
ELISA是一种免疫测定,基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。



抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力, 可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab],Ag·Ab 的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。


化学比色法的敏感度为mg/ml水平;
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml;
标记的免疫敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平;
例如,HBsAg(乙型肝炎表面抗原),。
2. 酶免疫测定类型
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay),简称ELISA。
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);
(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);
(3)酶反应的底物。
可设计出各种不同类型的检测方法。