文档介绍：酶联免疫吸附实验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
——检测乙肝表面抗原
实验目的要求
掌握ELISA的基本原理
掌握ELISA双抗体夹心法检测HBsAg的原理、操作方法及结果判断
熟悉表面抗原检测的临床意义
(一)ELISA的原理
ELISA的基本原理
三种必要的试剂:
①固相的抗原或抗体,即“免疫吸附剂”(immunosorbent)
②酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate)
③酶作用的底物
在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
1 双抗体夹心法
——是检测抗原最常用的方法
操作步骤
1)将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体,洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2)加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物,洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体,此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。
应用
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等
不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。