文档介绍：实验五酶联免疫吸附实验
免疫酶技术
免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体(或抗原)联结,与相应的抗原(或抗体)作用后,通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量,亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究,即酶免疫组织化学技术。
目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA)。
ELISA简介
1971年瑞典学者 Engvall 和Perlmann,荷兰学者Van Weeman和 Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,称为酶联免疫吸附实验(ELISA)
ELISA基本的实验过程
包被:将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面,使抗原或抗体固相化
抗原抗体反应:先后加入被检标本和酶结合物,使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定
酶促反应:在反应体系中加入酶作用的底物,使发生酶促反应而显色
ELISA检测抗原
Ag + Ab* Ag-Ab*
ELISA检测抗体
Ab + Ag* Ab-Ag*
由于结合在抗原—抗体复合物上的荧光抗体显著多于直接法,从而提高了敏感性。如细胞抗原上每个分子结合3~5个分子抗体,当此抗体作为抗原时又可结合3—5分子的荧光抗体,所以和直接法相比荧光亮度可增强3或4倍。此法除灵敏性高外,它只需要制备一种种属间接荧光抗体,可以适用于多种第一抗体的标记显示,这是现在最广泛应用的技术。
间接法比直接法灵敏
酶标板
酶标仪