文档介绍：流式细胞学
血液科
流式细胞仪检测原理
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激光光源:常用的是氩离子(488nm)和氦氖离子(633nm)气体激光管;一般选配2-4根激光,488nm 、633nm和355nm、407nmUV激光。最多检测13个荧光参数。
:由若干组透镜、小孔、滤光片组成。滤光片分长通(LP)、带通(BP)、短通(SP)、二向滤光片,不同组合的滤片可以将不同波长的荧光信号送到不同的光电倍增管;
:在激光检测区产生散射光和荧光信号;由光电倍增管(PMT):将荧光信号转换为电信号,并将信号放大,通过计算机处理得到结果。
流式细胞仪检测原理
前向角散射光(FSC):角度接近0度,反映细胞体积大小,但受细胞折射率影响,如细胞不是球形时(精子、红细胞)变化大;
侧向角散射(SSC):角度接近90度,反映细胞内相对复杂性,主要是细胞内颗粒的性状和核膜的折射率。
结果显示:单参数直方图,双参数二维点图,等高图,二维密度图,三维图。
流式细胞仪检测原理
荧光染料标记:常用FITC(异硫***酸荧光素)和PI(碘化丙啶)。
荧光信号:每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱,与被照射的时间和激发光的强度有关。
原理:物质吸收一定波长的光后会发出更长波长的光。荧光信号可反映膜抗原、受体、DNA等相对数量。光源的激发波长尽可能接近染料的激发光谱峰值(吸收光波长),但发射波长(荧光波长)必须不同。因每个荧光检测器只检测特定波长的荧光信号。
荧光染料种类
FITC(异硫***酸荧光素):492nm ;530nm 绿色
PE(藻红蛋白): 480nm;575nm ;橙黄色
PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白):
490nm; 675nm深红色
PI(碘化丙啶): 493nm; 620nm橙红色
APC(别藻兰蛋白):650nm;660nm红色
鞘液流动室
光散射原理示意图