文档介绍：细胞培养 Cell culture
模拟体内的生理环境,在无菌、适温和丰富的营养条件下,使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。
体外培养细胞的特性
培养细胞的生长方式
贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长:于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
细胞培养基本概念
原代培养
动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长,在传代之前称为原代培养。
传代
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中。
细胞系 cell line 原代培养物成功传代后,则称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(finite cell line);已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系(infinite cell line)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,有的可能已成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。
细胞株 cell strain 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群,称细胞株。通常将具有特殊性质或标志物的细胞群称为细胞株。
实验室常用的细胞培养
常用的名称
组织来源
Hep-2
HeLa
A549
Vero
HEK
CHO
…
人喉癌
人子宫颈癌
人肺癌
非洲绿猴肾
人胚肾
中国地鼠卵巢细胞
…
代表性的细胞命名法
细胞名称
命名意义
HeLa
为供体患者的姓名(来源于宫颈癌)
CHO
中国地鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary)
宫-743
宫颈癌上皮细胞,1974年3月建立
NIH3T3
美国国立卫生研究所(National Institute of Health)建立;每3天传代,每次接种3×105细胞/毫升。
美国已有美国标准细胞库或细胞银行()和人遗传突变细胞库(HGMR)、细胞衰老细胞库(CAR)等,其中不仅是美国也世界最大的细胞库。也是世界卫生组织WHO的国际培养细胞文献中心。现液氮冻存有3200个已经过鉴定的细胞系,其中包括来自正常人和各种疾病患者的皮肤成纤维细胞系和来自不同物种的近75个杂交瘤细胞株。接纳来自世界各国已经鉴定的细胞予以贮存,同时也向世界各国的研究者或实验室免费提供研究用细胞(做盈利性研究时收费)。
游离期:
。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。
10分钟一4小时
贴壁期:
细胞附着于底物上,游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
底物:胶原、玻璃、塑料、其它细胞等
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白(生长基质),这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上,悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
进口塑料培养瓶涂有生长基质(化学合成的功能基团)