文档介绍：高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺论文
饶钦雄童敬郭平李海燕李晓薇丁双阳
【摘要】建立了高效毛细管电泳二极管阵列检测器检测鸡蛋中三聚氰胺的方法。样品用三氯乙酸提取,固相萃取小柱净化处理后进行检测,以50 mmol/L甲酸50 mmol/L甲酸铵(pH )为缓冲溶液, cm,内径为75 μm的毛细管中,分离时间约6 min, mg/kg。~ mg/kg范围内进行添加回收实验,%~%.freelg/kg。建立鸡蛋中三聚氰胺残留的检测方法是十分必要。
目前,检测三聚氰胺的方法主要有液相色谱法2~5、液相色谱质谱联用法6~8和气相色谱质谱联用法9,10,其检测样品多为饲料,鸡蛋中三聚氰胺的检测方法的报道较少。杨水平等11报道了鸡蛋中三聚氰胺的表面解吸常压化学电离串联质谱法成像。毛细管电泳是近十几年发展起来的分离技术,具有高效快速、灵敏度高、自动化高、经济环保等优点,已成为生物化学和分析化学领域中发展最快的一种分离分析技术。本研究建立了鸡蛋中三聚氰胺的毛细管电泳检测方法,操作简便、分析快速、稳定可靠且经济环保,可作为鸡蛋样品中三聚氰胺测定的初筛方法。如果与质谱或电化学检测器联用,可以获得更高的灵敏度。
2 实验部分
仪器与试剂
HP3D高效毛细管电泳仪(德国Agilent公司)配二极管阵列检测器;拓展光程毛细管柱( cm,有效长度56 cm,内径75 μm,德国Agilent公司);CX固相萃取小柱(3 mL,60 mg);Effendorf 5804高速冷冻离心机(德国Effendorf公司); Sartorius PB21 pH计(德国Sartourius公司)。电泳缓冲溶液: 50 mmol/L甲酸50 mmol/L甲酸铵(pH ,色谱纯);三聚氰胺标准品(纯度 99%,Sigma公司),用V(20%甲醇)∶V(水)=2∶8混合液溶解成500 mg/L储备液;三氯乙酸、甲醇等其它试剂均为分析纯;实验用水均为超纯水。
鸡蛋样品的前处理
生鸡蛋全蛋搅拌均匀, g,加入20 mL 2%三氯乙酸溶液,超声10 min、振荡10 min后,以9000 r/min离心5 min,上清液过固相萃取小柱(SPE, 预先用3 mL甲醇和3 mL水活化小柱),自然流干后分别用3 mL水和3 mL甲醇洗涤,抽干SPE柱,用5 mL 5%氨化甲醇(V/V)洗脱。洗脱液在50 ℃用N2吹干,以500 μL 20%甲醇H2O复溶,滤膜过滤后上机检测。
g,其余处理过程同生鸡蛋。
实验方法
毛细管电泳运行电压25 kV; kPa×8 s进样;检测波长232 nm;温度25 ℃。为提高分析的重现性,毛细管在进样前用运行缓冲溶液冲洗20 min; 进样间用缓冲溶液冲洗3 min; mol/L NaOH 冲洗5 min,超纯水冲洗10 min。
三聚氰胺储备液用20%甲醇水依次配制成1、 5、 10、 20、 40、 80和100 mg/L工作液,每个浓度进样3次,以分析物的峰面积和浓度建立校准曲线。
3 结果