文档介绍：复****br/>1、色谱分析法分类
2、气相色谱分析法的应用范围
(1)较低沸点(450℃以下)、相对分子质量在400以下的物质(20%的有机物)
(2)受热不易分解的物质
(3)气体样品、易挥发液体样品或固体样品
3、气相色谱分析法应用的局限性
不能分析高沸点的物质、相对分子质量大的物质、受热易分解的物质、生物活性物质、多种天然产物(80%的有机物)。
第八章高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography,HPLC
第二节高效液相色谱仪
一、高压输液系统
贮液器、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等。
1、贮液器
(1)贮液器作用——盛放流动相液体
(2)贮液器材料——不锈钢瓶、玻璃瓶、聚四***乙烯瓶。
(3)贮液器要求——容积大(~5L),耐压,材料惰性,脱气方便。
2、高压输液泵——往复式恒流泵
(1)作用——将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱分离系统。
(2)常用高压输液泵——往复式恒流泵(适用于梯度洗脱)
往复式恒流泵结构及作用原理
3、流动相的净化
(1)过滤
①过滤方法
。
高压输液泵的进口和它的出口与进样阀之间安装过滤器。
过滤的目的
除去溶剂中机械杂质(微小的固体颗粒),防止阻塞输液管道或进样阀。
高压泵在高压下操作,柱塞、密封垫必须紧密配合,以保证不漏液。
溶剂的微小固体颗粒——损坏泵并降低柱效,缩短柱寿命。
磨损泵的活塞、密封垫、单向阀,堵塞柱头垫片的微孔等。
(2)脱气——除去溶剂中的空气
脱气目的——防止流动相从高压色谱柱流向常压检测器时,由气泡的释放面产生电噪声,使基线不稳。
脱气方法——超声波脱气(振荡脱气),惰性气体鼓泡脱气,在线脱气。
4、洗脱方式
(1)等度洗脱(恒组成溶剂洗脱)
以固定配比的溶剂系统洗脱组分(1个泵),类似GC的等温度洗脱。
适用于极性相差较小的样品。
(2)梯度(流动相)洗脱
①梯度洗脱
在分离过程中,按一定程序间断或连续的改变流动相的种类和比例,使流动相的极性、pH值或离子强度相应地变化的过程。类似GC的程序升温(沸点差别较大的样品)。适于分析极性差别较大的复杂样品。
②梯度洗脱装置
③梯度洗脱装置的分类
低压梯度洗脱:两种或两种以上溶剂在常压下按一定比例输入泵前的混合室混合均匀后,再用高压泵输送到柱系统。
优点:只需一个高压泵,成本低廉,使用方便。
高压梯度洗脱:将两种或两种以上溶剂分别用两个或两个以上高压泵增压后,注入梯度混合室混合,再输送至柱系统。
优点:只要通过梯度程序控制器控制每台泵的输出,就能获得任意梯度,且精度很高,易于实现自动化控制。
缺点:使用两台或两台以上高压泵,价格比较昂贵,故障率较高。
④梯度洗脱与程序升温区别
梯度洗脱是通过不断地变化流动相组成,调整混合样品中各组分的k值,提高分离效果,缩短分析时间。适于分析极性差别较大的复杂样品。
气相色谱中的程序升温是通过不断改变温度(温度程序),调整混合样品中各组分的k值,提高分离效果,缩短分析时间。适于分析沸点差别较大的复杂样品。
HPLC梯度洗脱与GC程序升温的比较
4、进样装置
(1)微量注射器
(2)自动进样器
(3)六通阀进样
5、色谱柱(预柱、分离柱)
6、检测器—连续监测色谱柱流出物(流动相、组分)组成和含量变化的装置。
(1)通用型检测器——连续监测色谱柱流出物全部特性的变化。
①通用型检测器类型
折光指数检测器(示差折光检测器)、电导检测器、蒸发光散射检测器等。
②通用型检测器的特点
对流动相有响应,易受温度变化、流动相流速和组成变化的影响,噪声和漂移都较大,灵敏度较低,不能用于梯度洗脱。
(2)专用型检测器——用于测量被分离样品组分某种特性的变化。
①专用型检测器类型
紫外检测器、荧光检测器、安培检测器等。
②专用型检测器的特点
灵敏度高,对流动相不响应,受操作条件变化和外界环境影响小,
可用于梯度洗脱操作,但应用范围受到一定的限制。
(3)常用检测器
①紫外-可见检测器(UV-Vis)——专用型
紫外-可见检测器结构
[问题] 样品池即流通池与分光光度法的吸收池有何不同?
紫外-可见检测器定量依据
应用(190~700nm)
含有双键、孤对电子的物质对紫外光有吸收。
烯烃、芳烃、、、—N=O、—N=N
缺点
不适用于对紫外光不吸收的物质;
溶剂对紫外光有吸收时不可用。
②折光指数检测器(RID)——通用型
通过连续检测通过参比池和样品池中溶液的折射率之差测定试样浓度。
溶液的折射率是溶剂(流动相)和溶质各自