第五节 反应动力学.ppt

文档介绍：第五节反应动力学
底物浓度的影响
酶浓度的影响
温度
pH的影响
抑制剂
激活剂的影响
一、酶的活力与测定
二、影响酶作用的因素
一、酶的活力与测定
P104
1、酶活力
检测酶含量及存在,很难直接用酶的“量”(质量、体积、浓度)来表示,而常用酶催化某一特定反应的能力来表示酶量,即用酶的活力表示。
酶活力:酶催化一定化学反应的能力;
酶活力通常以最适条件下酶所催化的化学反应的速度来确定。反应速率愈大,酶的活力愈高;反之愈小。
P105
测定酶活力,应测定酶促反应的初速度。初速度与酶量呈线性关系,初速度代表制剂中酶的含量。
斜率=[P]/ t = V 初速度
[P]
t
2、酶促反应速度的测定
酶反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的生成量来表示。
在实验中底物经常是过量的,测定时不易准确,而产物的生成是从无到有的,测定准确。
非线性原因:
底物浓度的降低;产物浓度增加加速逆反应进行;产物对酶抑制;时间过长酶失活。
3、酶活力测定方法
终点法(中止反应法): 酶反应进行到一定时间后终止其反应,再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。
动力学法:连续测定反应过程中产物/底物或辅酶的变化量,直接测定出酶反应的初速度。
4、酶活力的表示方法(最适条件下25OC)
活力单位(active unit)
习惯单位(U): 底物(或产物)变化量/ 单位时间
酶的含量用每克制剂或每毫升酶制剂含多少酶单位表示(U/g,U/ml)
国际单位(IU): 1μmoL(底物或产物)变化量/ 分钟
催量单位Katal(Kat):转化1moL底物的酶量/ 秒
比活力=
总活力单位
总蛋白mg数
= U(或IU) mg蛋白
量度酶催化能力大小
量度酶纯度
比活力(specific activity)
kat与IU的换算: 1 IU=×10-9 kat
* 1Kat =6107 IU
酶活力的测定条件:足够的底物浓度、最适pH、最适温度、适合的缓冲液、适量的激活剂及辅助成分、去除抑制剂、适合的终止反应及检测方法
*酶的活性单位是衡量酶活力大小的尺度,它反应在规定条件下,酶促反应在单位时间(s、min或h)内生成一定量(mg、μg、μmol等)的产物或消耗一定数量的底物所需的酶量。
二、影响酶作用的因素
P73
(一)底物浓度对反应速度的影响
*单底物、单产物反应
*酶促反应速度一般在规定的反应条件下,用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示
*底物浓度远远大于酶浓度
反应速度取其初速度,即底物的消耗量很小(一般在5﹪以内)时的反应速度
产
物
0 时间
初速度
酶促反应速度逐渐降低
酶促反应的时间进展曲线