文档介绍：硕士学位论文Y一氨基丁酸对人卵巢颗粒细胞雌二醇和孕***分泌及凋亡的影响硕士研究生:杨美琼指导教师:(-arninobutyricacid,GABA)由谷氨酸在谷氨酸脱羧酶的作用下脱羧而成,是中枢抑制性神经递质。近年来人们发现30多种外周组织中有GABA存在,特别是卵巢和输卵管中含量最高,提示GABA可能对生殖系统有某种生理作用。进一步研究发现,大鼠卵巢中有GABA能神经元,卵巢组织上有GABA的特异性结合位点。动物实验提示外源性GABA对黄素化颗粒细胞分泌雌二醇(Estradiol,E2)和孕***(Progesterone,P)有抑制作用,并且这种抑制作用可能与GABA受体及腺苷酸环化酶系统有关。有资料表明GABA可促进体外培养的大鼠黄体颗粒细胞自发凋亡。国内外许多学者报道IVF-ET中颗粒细胞凋亡增加影响妊娠的结局。本实验利用电化学发光法探索外源性GABA影响人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌二醇及孕***的可能机制,并且通过TUNNEL法检测外源性GABA对人黄素化颗粒细胞凋亡的影响,并利用ELISA法测定GABA浓度,探索外源性GABA对IVF-ET妊娠结局的影响。第一部分GABA对人卵巢颗粒细胞雌二醇和孕***分泌的影响文献已证实外源性GABA对大鼠卵巢黄素化颗粒细胞分泌E:和P有抑制作用,并且可能与GABA受体及腺苷酸环化酶系统有关。但外源性GABA是否对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌E:和P也有抑制作用,尚未有人做过这样的报道。中文摘要【研究目的】本实验采用电化学发光法(electrochemiluminescenceECL)探索外源性GABA对人卵巢巢黄素化颗粒细胞分泌E。和P的可能作用机制。【材料和方法】--ET的患者32例,且为首个IVF/ICSI—ET治疗周期,年龄均小于35岁,不孕原因均为输卵管因素不孕或男性因素不孕,均采用长周期降调节方案。在取卵日获取患者卵泡液,离心分离黄素化颗粒细胞,将分离出的黄素化颗粒细胞分为4组进行体外培养24小时,换液,换为无血清培养基,加入处理因子,使培养液的终体积为lml,GABA浓度为4×10咱'mol/L,GABA阻断剂荷包牡丹碱(Bicuculine)浓度为lX10。6mol/L,腺苷酸环化酶激动剂(Forskolin)浓度为lxlO唱mol/L,人绒毛膜促性腺激素(hCG),继续培养24d,时留取上清液液待测。2分组(1)加入GABA(4×10。6'mol/L),观察GABA:对人卵巢黄体化颗粒细胞雌二醇及孕***分泌的影响(n=8),分为2组:对照组;GABA组。(2)加入GABA阻断剂荷包牡丹碱(Bicuculine,l×10。6'mol/L),观察GABA对Bicuculine诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞雌二醇及孕***分泌的影响(n=8),分为4组:对照组;GABA组;Bicuculine;GABA+Bicuculine。(3).加入腺苷酸环化酶激动剂(Forskolin,,lxlO—mol/L),观察GABA对"Forskolin诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞雌二醇及孕***分泌的影响(n=8),分为4组:对照组;GABA组;Forskolin;GABA+Forskolin。(4)加入人绒毛膜促性腺激素(hCG,),观察GABA对hCG诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞雌二醇及孕***分泌的影响(n=8),分为4组:对照组;GABA组:hCG;GABA+hCG。3统计学方法人雌二醇和孕***测定采用电化学发光法试剂盒检测上清液中E:和P浓度,比较各组中激素浓度的变化。,采硕士学位论文用独立样本,检验比较对照组与GABA组之间激素水平的差异;采用析因方差分析比较各处理组与对照组之间激素水平的差异,独立样本r检验进行两两比较。P<。【结果】×10喝mol/L的GABA抑制人卵巢黄体化颗粒细胞E。和P的分泌;(Bicueuline)能促进人卵巢黄体化颗粒细胞E。和P的分泌,并且GABA能抑$!JBicuculine诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞E。和P的分泌;(Forskolin)能促进人卵巢黄体化颗粒细胞E。和P的分泌,并且GABA能抑制Forskolin诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞E:和P的分泌;(hCG)能促进入卵巢黄体化颗粒细胞E2和P的分泌,并且GABA能抑制hCG诱导的人卵巢黄体化颗粒细胞E:和P的分泌。【小结】本实验提示:×10。6m01几的GABA