文档介绍：
高中生物:
工程核心知识点
专题1基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创

高中生物:
工程核心知识点
专题1基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
（一）基因工程的基本工具
1•“分子手术刀”一一限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DN***段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E・coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：
相同点：都缝合磷酸二酯键。
区别：E・coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DN***段互补的黏性末端之
间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较
低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接两个DN***段的末端，形成磷酸二酯键。
“分子运输车”一一载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
具有一至多个限制酶切点，供外源DN***段插入。
具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒
基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
2•原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。

原理：DNA双链复制
过程：第一步：加热至90〜95°CDNA解链；第二步：冷却到55〜60°C，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70〜75°C，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2•组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
启动子：是一段有特殊结构的DN***段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
终止子：也是一段有特殊结构的DN***段，位于基因的尾端。
标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞
转化的概念:是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内