文档介绍：实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
由NordriDesign提供

血清蛋白中含有清蛋白、 α1球蛋白、 α2球蛋白、β－球蛋白、 γ －球蛋白等。各种蛋白质由于立体构象、分子量、等电实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
由NordriDesign提供

血清蛋白中含有清蛋白、 α1球蛋白、 α2球蛋白、β－球蛋白、 γ －球蛋白等。各种蛋白质由于立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。，在pH=，都带负电荷，电泳时向正极移动。由于迁移率不同而被分离。
pH < pI < pH
Proten （-） Proten （0） Proten （+）
结果示意图：
γ β α2 α1 清蛋白
分子量小、等电点低的，在相同碱性PH缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。，染色后可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次是球蛋白。
实验器具及试剂
醋酸纤维薄膜(2X8mm)；毛细管（-）；染色皿，漂洗器，
镊子；常压电泳仪；电泳仪；水平电泳槽；粗滤纸；直尺和铅笔
小牛血清；巴比妥缓冲液（），氨基黑10B，漂洗液（配方同书上）
实验步骤
浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜放在缓冲液中浸泡20分
钟。识别出光面与毛面，并在角上做好记号。
点样：把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干
多余的液体，然后铺在干净的平皿盖上(无光泽面
点样)，将毛细管在血清中沾一下，再在膜条一端
1cm厘米处轻轻水平地落下并随时提起，这样
即在膜条上点上了点状的血清样品。（一块膜
条可以点两个样点）
电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面
等高，将膜条上样面平行扣于电泳槽支架的滤纸桥上。膜
条点样的一端放在负极上。通电，调节电压为160V，
记录电泳强度,。
染色：电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5-10分
钟。
漂洗：将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液申漂洗数
次至无蛋白区底色脱净为止，可得到色带清晰的
电泳图谱。
透明处理、定量测定
注意事项
点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免液体引起样品扩散,但不宜太干,否则样品难以进入膜内,影响分离效果.
点样时,用力不要太大,以免损坏膜片,或印出凹陷影响电泳区带分离效果.
点样量要适当,不宜过多过少.
思考？
1．电泳时，点样端为什么要置于电场的负极？
2．电泳图谱清晰的关键是什么？分析你的电泳图谱，试讨论还可以从哪些地方进行改进。
3. 常用的蛋白质分离的方法有哪些？
4. 上样量过大，对结果会有什么影响？
上样量过小，又是什么结果？
谢谢