文档介绍：土壤微生物的分离纯化
目的要求
掌握常用的分离纯化微生物的基本操作及计数方法
实验材料
样品:新鲜土壤。
培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
无菌水:99mL无菌水三角瓶
装有9mL无菌水的试管。
其它:无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸
倒平板的方法
将培养基加热融化,待冷却至55-60 0C时,倒平板。
制备土壤稀释液
1、,放入99mL无菌水的三角瓶中,振荡摇匀,即为稀释10-2的土壤悬液。
2、另取装有无菌试管5支,用记号笔编上10-3、10-4、10-5、10-6 。在每只试管中用无菌吸管加入9ml无菌水。
3、取已稀释成10-2的土壤液,,-3的无菌水的试管中,并在试管内轻轻吹吸数次,使之充分混匀,即成10-3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10-4 →10 - 5 → 10-6土壤稀释液。
在土壤稀释过程中,应用一支吸管由浓到稀,稀释到底,稀释方法见图7-3。
平板涂布法
倒培养基,制成平板。
凝固后,。
用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于370C条件下培养1~2d,观察菌落形态及计数菌落,并计算出每g土壤中放线菌的数量。如果样品稀释适当的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。
挑取单个菌落,接种于相应的斜面培养基上,如果不纯,再移植纯化,至最后得到纯培养为止。
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数
×
1/取样体积数
×
稀释倍数
凝固后
28~30℃培养
涂布法流程图
思考题
平板培养时为什么要把培养皿倒置?
如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养?