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大批的研究表示线粒体与细胞凋亡亲密有关，此中线粒体跨膜电位（△的损坏，被以为是细胞凋
亡级联反响过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特点（染色质浓缩、DNA断裂）出现以前，
一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不能够逆转。
JC-1(5,5’,6,6-tetrachloro’-1,1’,3,3-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine’iodide)
是一种阳离子脂质荧光染
料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存
在，高浓度时以多聚体形式存在，二者的发射光谱不一样样，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿
色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态齐集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△）拥有极性，JC-1
依靠于△的极性被快速摄取线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧
光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从
线粒体内开释，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。根椐这一特点检测线粒体膜电位
的变化。
所需仪器或许试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心计、CO2培育箱、微量移液器
、载玻片、盖玻片（荧光显微镜察看需用）、PBS、灭菌去离
子水
使用注意事项
1
．微量试剂取用前请离心集液。
2
．JC-1避光保留及使用。
3
．细胞培育的数目不宜超出1×106，不然细胞会产生自然凋亡影响检测。
4
．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清代替Buffer
孵育染色及冲刷，或延伸察看时间
5
．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化遇到多种要素的影响，因引诱剂、细胞株种类，作用时
间的不一样样而荧光强度比率都有不一样样，所以没有通用标准的赔偿设门指南，
所以每个试验需设
阴性及阳性比较组进行荧光赔偿及设门。
6
．组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，
可采用凯基细胞悬液制备试剂
盒（KGA829）或线粒体提取试剂盒（KGA827）。
操作方法
1．
用适合的方法引诱细胞凋亡，同时建立阴性比较组和阳性比较组星形孢菌素，staurosporine），引诱合合时间后经其余检测（如
【用适合的凋亡引诱剂（如
AnnexinV或Caspase3
活性）证明确有凋亡产生】，采集细胞；
2．用PBS冲刷细胞二次（离心
2000rpm，5min），采集不多于1×106的细胞；
3．取100μL10×Incubation
Buffer
加900μL灭菌去离子水稀释成
1×IncubationBuffer，
混匀并预热至37℃；
4．汲取500μL1×IncubationBuffer
，加入1μLJC-1
，涡旋混匀配成JC-1工作液；
【因JC-1在水中的溶解度很小，所以能够经过离心的方法（
10，000rpm，1min）去除不溶
的颗粒，汲取离心后的上清使用，以除去搅乱】
5．取500μLJC-1工作液将细胞平均悬浮，37℃，5%CO的培育箱中孵育15~20min；
2
6．室温离心（2000rpm，5min）采集细胞，用1×IncubationBuffer
洗两次；
7．汲取500μL1×IncubationBuffer
从头悬浮细胞；
8．荧光显微镜察看或流式细胞仪分析。
荧光显微镜察看
1．滴一滴上述细胞悬液于载玻片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下察看；
2．关于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培育细胞并引诱细胞凋亡；用PBS冲刷细胞两次；
滴加100μLJC-1工作液，加盖玻片，37℃，5%CO2的培育箱中孵育15~20min；1×Incubation
Buffe冲刷1~2遍；将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下察看；
正常细胞：双色滤光片察看则为：绿
色
++红++（高绿高红），如在同一滤光片下察看则为黄绿
凋亡细胞：双色滤光片察看则为：绿
++红+（高绿低红），
如在同一滤光片下察看则为绿色
流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测（Ex=488nm;Em=530nm）细胞凋亡的状况，绿色荧光经过FITC通道通
常为FL1来检测；红色荧光经过PI通道平常为FL2来检测。.正常细胞{FL-1亮,FL-2亮;R1}，
凋亡细胞{FL-1亮,FL-2暗;R2}，设门的地点根椐细胞种类、实验条件等不一样样而变化，试验需
设未经办理的正常细胞为阴性比较组和阳性比较组，根椐阴性和阳性比较组的双参数散点图来
设定门的地点。