文档介绍：核酸提取及常见问题分析
核酸是遗传信息的载体,包括DNA和RNA,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。
前言
第一部分:DNA提取方法简介
第二部分:DNA提取常见问题、
原因分析及其对策
内容
第三部分:RNA提取方法简介
第四部分:RNA提取及其RT-PCR常见
问题、原因分析及其对策
DNA提取的几种方法
染色体DNA的提取
CTAB法
SDS法
其它
DNA提取的几种方法
非染色体DNA的提取
质粒DNA的提取
碱裂解法
煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
差速离心结合SDS裂解法
基因组DNA-CTAB法
CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中(> NaCl)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
SDS法原理
基因组DNA-SDS法
SDS(十二烷基硫酸钠)是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65℃)条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸;
提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度(冰浴),使蛋白质及多糖杂质沉淀,离心后除去沉淀;
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
基因组DNA-其它方法
物理方式:玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法
化学方式:异硫氰酸胍法、碱裂解法
生物方式:酶法
根据细胞裂解方式的不同有:
基因组DNA-其它方法
吸附材料结合法:
根据核酸分离纯化方式的不同有:
硅质材料
阴离子交换树脂
磁珠
高盐低pH值结合核酸,低盐高pH值洗脱。
快捷高效。
低盐高pH值结合核酸,高盐低pH值洗脱。
适用于纯度要求高的实验。
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物,从而达到分离目的。
基因组DNA-其它方法
浓盐法:
有机溶剂抽提法:
密度梯度离心法:
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同,将二者分离
有机溶剂作为蛋白变性剂,同时抑制核酸酶的降解作用
利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物