文档介绍：沙门菌临床检验分析
刘丽萍(双鸭山煤炭总医院黑龙江双鸭山 155100)
【中图分类号】+2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)04-0064-03
沙门菌属广泛分布于自然界,通常寄居于人或动物肠道内是肠杆菌科的重要致病菌属,可使人和动物致病。它由6个亚属组成,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅲ;已发现的沙门菌有2000多个菌型。沙门菌是一大群形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。
沙门菌检验和鉴定较为复杂,一般分为前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定和血清学分型5个步骤进行。
一样本采集
根据疾病的类型、病情和病程的不同采取不同的样本。
,在病程的第1~2周内采集静脉血,在1~3周内不采集骨髓液。
;胃肠炎病人在急性期、早期采集新鲜粪便,最好在用药前采集;带菌者可用直肠拭子采集直肠表面粘膜。在病程的第二周,肠热症病人亦可采集中断尿或无菌导尿,经3000r/min离心沉淀后供检验用。
,除采集粪便外,还应采集呕吐物和可疑食物样本,新鲜肉类用无菌剪刀采取,于无菌器皿内送检。
(1)如胆汁、脑脊液、胸水、腹水等经离心沉淀后供用;用拭子采集中耳分泌物、渗出液、脓液、咽喉、阴道等液。
(2)健康相关产品,可采集各类食品、化妆品、卫生用品和药品等。
二培养基和试剂
(1)所用培养基和配制缓冲蛋白胨水(BP):氯化镁孔雀绿(MM)增菌液;四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液;亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸铋琼脂(BS);胆盐硫乳(DHL)琼脂;HE琼脂;WS琼脂;SS琼脂三糖铁(TSI)琼脂;蛋白胨水、靛基质试剂;尿素琼脂();氰化钾(KCN)培养基;氨基酸脱羧酶试验培养基;糖发酵管;“;ONPG培养基;半固体琼脂;丙二酸盐培养基“”。
(2)沙门菌因子血清按照26种用于初步分型;57种用于进一步分型;163种用于详细分型进行选用。
检验步骤(以食品中沙门菌检验为例)
、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。称取检样25g加入盛有225ml缓冲蛋白胨水的500ml广口瓶内。固体食品可先以匀质器于8000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化,在36℃±1℃培养4h(干蛋品培养18~24h),移取10ml转种于100ml氯化镁孔绿肉汤增菌液内,42℃下培养18~24h。同时另取10ml,转种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内,36℃±1℃下培养18~24h。
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品无需经过前增菌。取检样25g(或25ml)加入灭菌生理盐水25ml,按前法制成检样匀液;取25ml接种于100ml氯化镁孔淮绿增菌液或四硫磺酸钠粕绿增菌液内,在42℃下培养24h;另取25ml接种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内,36℃±1℃下培养18~24h。
,画线接种于一个亚硫酸饿琼脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE、WS、SS)或40~48h(BS),观察各平板上