文档介绍：实验二十六
血清甘油三酯含量测定
一、目的与要求
1、了解血清甘油三酯含量测定的正常值与临床意义
2、掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理及主要技术方法
TG
3R(CH)2COOK
甘油
KOH皂化TG
+ 2HIO4
2HCHO(甲醛)
+乙酰丙酮+铵离子
3, 5-二乙酰-1, 4-二氢二甲基吡啶,
与同样处理的标准管进行比色,可测出甘油三酯的含量。
氧化
二、原理:
三、操作步骤:
1、抽提
取三只小试管依次加入样品,TG标准液,蒸馏水,抽提剂及硫酸,充分振荡10min; 静置20min后,吸取上层液。
2、皂化反应
取三只大试管加入上层液,异丙醇及皂化试剂,混匀后,放置65℃水浴5min。
3、氧化显色
加入氧化试剂,混匀后加入乙酰丙酮并混匀, 65℃水浴15min,取出后于420nm处比色。
四、结果计算:
C(TG)( mg/ml ) =A测定管/A标准管**1 /
C(TG) ( mg/dl )=C(TG)*100
正常参考值为30-150mg/dl。
五、注意事项:
1、抽提时摇匀静置,待完全分层后才能吸取上层液,吸取上层液时不能吸入下层液,摇匀时勿将试剂撒出。
2 、选用小试管时试管口径不能太细,否则溶液过多不能振荡混匀。
3、甘油三酯平均分子量为885。
4、试管使用时需要干燥,清洗需要用洗涤剂。
分光光度计的使用
1、打开分光光度计,预热20-30min。
2、调节旋钮至需要的光波长。
3、检查拉杆是否在分光光度计的休息状态。
调100% : T档拉杆1档空白管
调0% : T档拉杆2档
测吸光度: A档拉杆3、4、5档标准管,测定管
休息状态: 拉杆2档
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