文档介绍：菌种的保存方法介绍
江西省临床检验中心
吴茂红
临床微生物实验室经常能够分离到一些有意义的菌种,但接种在平板上的细菌放 4℃冰箱只能保存数天,并且细菌在培养基上移种 3次后,其形态、菌落、毒力等均易发生变异[1],监测日常工作的室内质控用标准菌株也需要长期留存。所以尽可能长期有效地留存菌种对于系统地分析当前流行株的生物学、分子生物学特征及耐药性变迁,医院感染病原学调查、新药临床研究都十分重要的意义。本文介绍几种常用的菌种保存方法
常规保存法
该法操作简单,只需普通冰箱保存,每个临床微生物实验室均可采用。但缺点是留存时间短,传代频繁,菌种易变异。
半固体穿刺保存法
用穿刺接种法将细菌培养物接种于半固体培养基内,经 37℃18-24h培养后,加一层无菌的液体石蜡,厚度约为 1cm,置冰箱保存。肠道杆菌及葡萄球菌等,一般可保存3-6个月。当需传代移种时,将半固体菌种管倾斜使液体石蜡流至一边,再取菌移种于新的培养基。将沾有少量液体石蜡的接种环浸于 95%酒精中片刻,再烧灼灭菌以免直接在酒精灯上烧灼时,液体石蜡四处溅散而引起污染。%高盐半固体,在室温下可保存 1个月。
斜面保存法
⑴普通琼脂斜面保存法:葡萄球菌、肠道杆菌等对营养要求不高的一股细菌可接种于普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏液,以防干涸(但变形杆菌"OX"及伤寒杆"O"菌株宜接种于干燥的琼脂斜面以防变异)。用橡皮塞塞紧,经37℃18-24h培养后,存放于 4℃冰箱中,一般可保存3-6个月。
⑷吕氏血清斜面:白喉棒状杆菌可保存在该培养基上,其成份为 1 %葡萄糖肉汤() 1份,无菌牛血清或兔血清 3份。白喉棒状杆菌在此培养基上生长迅速、旺盛,菌体形态典型,如在培养基中再加入 5%-10%的中性甘油,则培养出的白喉棒状杆菌异染颗粒更为明显,单24小时后即衰老成为多形态,很少有异染颗粒,菌体粗大3-4倍,置 4℃可保存 2周至 1个月。
砂土管保存法
适用于产芽孢的细菌
将过筛后的中性细砂烘干,装入小试管内约lcm高,塞以棉塞,灭菌烘干备用。用无菌生理盐水洗下培养基上的细菌培养物,制成菌悬液。,以砂土全部浸湿为度。塞好棉塞,放入干燥器内抽干。然后放在装有***化钙(吸水剂)的干燥瓶内,置冰箱保存备用。需用时可取一接种环砂土接种于适宜培养基上培养即可。
低温冷冻保存法
实验室必须配备-20℃以下低温冰箱,冰箱温度越低,保存的时间越长。