文档介绍：该【淋病奈瑟菌的分子生物学检验 】是由【读书之乐】上传分享，文档一共【16】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【淋病奈瑟菌的分子生物学检验 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。淋病奈瑟菌的分子生物学检验*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*目录淋病奈瑟菌的简单介绍一、淋病奈瑟菌的基因组结构特征二、淋病奈瑟菌的分子生物学检验内容(一)淋病奈瑟菌核酸的检测(二)淋病奈瑟菌的耐药性检测三、分子生物学检验的临床意义*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*淋病奈瑟菌淋球菌(i)又名淋病奈瑟菌(neisseriagonorrhea,NG),是淋病的病原菌。淋球菌革兰染色阴性,是严格的人体寄生菌,常存在于急性尿道炎与***炎的脓性分泌物的白细胞中,形态染色类似于脑膜炎球菌。人类是淋球菌唯一的自然宿主,淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖,男性发生尿道炎,女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底,可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力,均易感,病后免疫力不强,不能防止再感染。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*目前,实验室诊断淋球菌感染的方法有:①直接涂片染色镜检,该方法敏感度和特异性差,尤其是在女性患者中检出率仅为50%左右,不能用于确诊;②分离培养法,临床检验诊断NG感染的金标准,但该方法对标本和培养基营养要求高,培养周期长,出临床报告慢,难以满足临床要求;③免疫学方法,无论是荧光法还是酶染法,由于分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体方法间的稳定性和条件限制,使推广应用受限。而分子生物学方法敏感、特异,可直接从临床标本中检出含量很低的病原菌,适于淋球菌的快速检测。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*一、淋病奈瑟菌的基因组结构特征淋病奈瑟菌FA1090菌株是最早被完成测序研究的淋病奈瑟菌菌株之一,,其中G+%。编码区的DNA长度占总长度的78%。共含有2069个基因,包括2002个具有编码功能的基因和67个编码结构性RNAs基。P11945的基因组结构。,据估计可以编码2622个开放性阅读框。同时,NCP11945含有一个能编码12个ORFs的质粒,其DNA长度为4153bp。据他们估计,整个基因组的编码基因的密度约为87%。全基因组平均G+%。这与FA1090菌株相类似。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*二、,也是淋病奈瑟菌基因诊断中最基本的方法。PCR引物的设计应选择与其相应的靶基因,多采用:①隐蔽质粒cppB基因(cppBH01/3、1/2及cppBN3/4);②16srRNA基因(SL67/59、NGPl/2);③porA假基因;④编码外膜蛋白基因(omp基因);⑤opa基因等;⑥胞嘧啶DNA***转移酶基因(RocheCobasAmplicor)。不同靶基因设计引物对PCR的敏感性和特异性有一定的影响。(一)淋病奈瑟菌核酸的检测*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*,国内外已有多家商品化的试剂盒提供,灵敏度、特异性很高,在临床分子检测中有着广泛应用。。Birkenmeyer等,针对3种不同靶基因的LCR进行比较,发现与培养相比LCR敏感性近100%,%。PageShafer等,利用LCR对男性***患者咽部标本进行检测,%%,%和100%,表明该方法检测咽拭子标本具有很好的敏感性。LCR操作便捷,适宜做大规模的性病普查。但该方法仞需进一步完善质量控制,避免污染导致的假阳性或抑制物所致的假阴性。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*。目前使用较多的是BectonDikinson公司生产的ProbeTecET,可以同时对CT和NG进行检测,ProbeTecET特异性扩增NG染色体PivNg基因,然后用荧光标记的探针检测其相应的DNA靶序列,2小时可以完成96份标本检测。与培养法相比具有很高的敏感性和特异性。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*(二)淋病奈瑟菌的耐药性检测随着抗生素的广泛使用,淋病奈瑟菌对抗生素的耐药率越来越高,其机制主要由染色体和质粒的基因改变而引起。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*(1)gyrA和parC基因:DNA旋转酶是***喹诺***类药物作用的靶位,由gyrA和gyrB基因编码。gyrA基因突变可导致酶结构的改变,阻止***喹诺***类药物进入靶位,引起耐药。gyrA基因突变与淋球菌低水平和中度水平***喹诺***类药物耐药有关,而对***喹诺***类药物高水平耐药是gyrA和parC共同参与基因突变的结果,gyrA和parC是***喹诺***耐药决定区(QRDR)中的两个重要基因。*淋病奈瑟菌的分子生物学检验*