文档介绍：该【目的基因的制备 】是由【读书之乐】上传分享，文档一共【116】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【目的基因的制备 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。一概述基因工程或DNA重组技术三大用途的前提条件是从生物体基因组中分离克隆目的基因。目的基因确定其表达调控机制和生物学功能建立高效表达系统构建具有经济价值的基因工程菌(细胞)体外进行必要的结构功能修饰输回细胞内改良生物体遗传性状,包括人体基因治疗2024/5/101目的基因的制备二什么是目的基因基因工程的主要目的是使优良性状相关的基因聚集在同一生物体中,创造出具有高度应用价值的新物种。为此必须从现有生物群体中,根据需要分离出此类基因,即准备要分离、改造、扩增或表达的基因通常称之为目的基因。如抗逆性相关基因(抗病、抗寒等)、生物药和保健品相关基因、毒物降解相关基因、工业用酶等相关基因等。2024/5/102目的基因的制备一般来说,目的基因的制备战略分为两大类一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库,即将某生物体的全基因组分段克隆,然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆;另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因,然后将之克隆表达。2024/5/103目的基因的制备第一节目的基因的制备1、直接法制备基因2、从基因组文库中钓取目的基因3、从cDNA文库中钓取目的基因4、通过PCR直接扩增出目的基因2024/5/(如质粒和病毒)中分离目的基因。①对已定序的DNA分子,只需用已知识别序列的限制性核酸内切酶进行一次或几次切割,分离纯化所需DN***段,与适当载体重组后转化受体菌后即可得到目的基因的克隆。②对已知定位的目的基因,只要根据目的基因两侧的已知的限制性内切酶识别位点,用适当的限制性内切酶切割,一次就可获得目的基因。2024/5/105目的基因的制备所谓基因就是具有特定生物学功能的一段核苷酸序列,所以只要掌握了其分子结构,完全可以在实验室进行人工合成。1977年,利用化学途径首次合成了编码脑激素的基因(生长激素释放因子基因),并在大肠杆菌中实现了成功的表达。从此,化学合成基因得到了很大的发展迅速。早期通过化学合成的部分基因基因人胰岛素转运RNA?-干扰素肠促胰液肽尿抑胃激素?-干扰素大小(bp)12654281162453合成年代197819791981198219821984基因视紫红质前脑菲肽ATP酶溶菌酶RNA酶T1RNA酶A大小(bp).:混合退火根据目的基因全序列,分别合成12-15碱基长的单链DNA小片段T4-:2024/5/107目的基因的制备混合退火T4-,分别合成12-15碱基长的单链DNA小片段以及20-30碱基长的单链DNA中片段2024/5/108目的基因的制备根据目的基因的全序列,分别合成40-50碱基长的单链DN***段混合退火T4-.,收率就愈高,但由于化学合成的份额较大,成本较高;在大片段酶促法合成目的基因时,虽然化学合成的份额相对较小,成本较低,但大片段化学合成的收率极低,例如,每聚合一个单体的产物收率为95%%2024/5/1010目的基因的制备