文档介绍：高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究
【摘要】目的提高雷公藤片的质量标准,摸索高效液相色谱(HPLC)法测定雷公藤片含量的方法。方法采用高效液相色谱法,C18柱,流动相为甲醇-水(40∶60),检测波长218 nm。 6~ 0 μg,r=,%, %(n=6)。结论雷公藤片含量测定限度暂定为:每片含雷公藤以雷公藤甲素(C37H22O14)计, mg/片。
【关键词】雷公藤片雷公藤甲素高效液相色谱
雷公藤片为卫矛科木质藤本植物雷公藤Tripterygium m× mm,5 μm);雷公藤甲素对照品( 中国药品生物制品检定所,批号0857-9601);甲醇为色谱纯,水为重蒸水;其他试剂为分析纯;雷公藤片由湖北三九黄石药业有限公司提供。
2 方法与结果
色谱条件
色谱柱为大连依利特Hypersil C18液相色谱柱(200 mm× mm,5μm);甲醇-水(40∶60)为流动相;检测波长218 nm;流速1 ml/min;柱温:35℃; 理论板数按雷公藤甲素峰计不低于3 000。
供试液制备方法和洗脱液用量的选择
供试液制备方法的选择
雷公藤制剂中成分较为复杂,不经提取精制难以得到较好的分离效果,参照常雪灵等[2]的结果表明,以醋酸乙酯溶液洗脱,收集洗脱液150 ml较合适。
流动相的选择以乙腈-水(30∶70)作为流动相进行试验,结果雷公藤甲素出峰较快,样品溶液难以得到较好分离,改用(15∶85),(20∶80),(25∶75)等雷公藤甲素均不出峰,最后选用甲醇-水(40∶60)为流动相,雷公藤甲素出峰时间约为11 min,样品溶液分离较好,无杂质峰干扰。
含量测定
对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量, mg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备
取本品30片,称定重量,研碎,精密称取10片量,加氯仿10 ml,超声10 min,加中性氧化铝1g,搅拌均匀,蒸干,上中性氧化铝柱(内径12 mm,100~200目,10 g),以醋酸乙酯溶液洗脱,收集洗脱液150 ml,蒸干,残渣加甲醇使溶解,定容至10 ml作为供试品溶液。
线性关系考察精密称取雷公藤甲素对照品适量, mg的溶液作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液1,2,4,6,8,10 ml,分别置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别进样20 μl,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,雷公藤甲素对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线, 计算得回归方程:Y=2 +,r= 1, 6~ 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
精密度实验
精密吸取同一对照品溶液20 μl,重复进样5次,测定雷公藤甲素的吸收峰面积,%,表明精密度良好。
稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液(批号040311),分别间隔2h进行测