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一、引言
甜柿是一种常见的果实,含有多种营养成分,广泛应用于食品和医药工业。多酚类物质是甜柿果实中的一种重要营养成分,具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性。因此,研究甜柿果实多酚类物质的提取工艺和其生物活性可以为果实的进一步应用提供参考和指导。
二、材料与方法
材料
本研究选用甜柿果实为原料。
方法
多酚类物质提取
采用超声波辅助法提取甜柿果实中的多酚类物质。具体操作步骤为:将甜柿果实去皮、去籽,切成小块后,放入乙醇中,比例为1:10,加热水浴回流提取2 h,然后采用超声波辅助法提取,超声波功率为200W,提取时间为20 min,温度控制在40℃,提取2次,每次提取后离心,将上清液浓缩至干燥。
多酚类物质成分分析
采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对甜柿果实中多酚类物质的成分进行分析。为保证样品的还原性,样品溶液在制备过程中添加一定量的还原剂。采用Waters XSelect HSS T3色谱柱(100 mm× mm, μm)进行分离,%甲酸水溶液,流动相B为甲酸乙腈溶液。梯度洗脱,离子源电压设置为+3500 V,离子源温度为120℃。
细胞培养和抗癌实验
采用甲烷二磷酸化蛋白(MAPK)抑制剂PD98059和核因子(NF-κB)抑制剂BAY11-7082对A549肺癌细胞株的生长进行抑制。A549细胞在RPMI-1640培养基中孵育,培养温度为37℃,气体含量为5%CO2,细胞密度为1×104/mL。将PD98059和BAY11-7082加入培养基中,浓度从10 μmol/L开始逐渐增加,培养72 h后采用MTT法检测细胞的生长状况。
三、结果
多酚类物质提取
采用超声波辅助法提取甜柿果实中的多酚类物质,%。
多酚类物质成分分析
采用HPLC-MS技术对甜柿果实中多酚类物质的成分进行分析,共检测出20个成分,包括儿茶素、黄酮类、花青素、异黄酮等多种多酚类物质。
细胞培养和抗癌实验
采用PD98059和BAY11-7082对A549肺癌细胞株的生长进行抑制。浓度为20 μmol/L时,PD98059和BAY11-7082对A549细胞生长的抑制率达到了48%和64%。
四、讨论
多酚类物质提取工艺的优化
本研究采用超声波辅助法提取甜柿果实中的多酚类物质,其提取率相对较高。超声波可通过机械振动产生剪切力和冲击力促进细胞壁的破裂,从而更好地释放多酚类物质。
多酚类物质成分分析
本研究采用HPLC-MS技术对甜柿果实中多酚类物质的成分进行了分析。结果显示,甜柿果实中含有多种多酚类物质,这些多酚类物质具有多种生物活性。
细胞培养和抗癌实验
本研究采用PD98059和BAY11-7082对A549肺癌细胞株的生长进行抑制。结果显示,PD98059和BAY11-7082对A549细胞生长具有一定的抑制作用。这表明甜柿果实中的多酚类物质可能对肺癌细胞具有抑制作用。
五、结论
本研究采用超声波辅助法提取甜柿果实中的多酚类物质,采用HPLC-MS技术对其成分进行分析,并通过抗癌实验证明其对A549肺癌细胞的抑制作用。这为甜柿果实的进一步开发利用提供了理论和实践基础。