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及常用仪器介绍
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授课:王琼
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分离纯化一般过程
原料液、动植物器官、组织
路线二
细胞-胞内产物
碎片分离
路线一
清液-胞外产物
细胞分离(离心、过滤)
细胞破碎
精制(结晶、干燥)
粗分离(盐析、萃取、超过滤)
纯化(层析、电泳)
脱盐(凝胶过滤、超过滤)
浓缩(超过滤)
一、离心技术
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ONE
离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。
01
离心技术是利用离心力对混合液(含有固形物)进行分离和沉淀的一种技术。
02
离心(centrifuge)
离心技术简介
01
离心分离是制备生物样品广泛应用的重要手段,可以分离:
03
细胞器(细胞核、细胞膜、线粒体)
05
小分子聚合物
02
活体生物(细胞、微生物、病毒)
04
生物大分子(核酸、蛋白质、酶、多聚物)
离心技术简介
离心技术的发展
1911-1912年,开始生产和使用低速(3,000 rpm以下)的商品化台式离心机
1923-1926年,瑞典UPPSALA大学Svedberg等科学家试制了世界上第一台试验型超速离心机(45,000 rpm)。1926年测定了马血红蛋白的分子量,获得诺贝尔化学奖。
1929年,Lamm完成了沉降方程。计算了沉降速度。定义了沉降系数
01
1940 年,Svedberg与Pederson出版了世界上第一本有关离心技术的专著
02
1943年,Pickels研制成现代固定角式离心转子
03
离心技术的发展
1951年,Brakke在差速离心的基础上发展了速率区带离心法。Kahler研制成功甩平转子;
1955年以后,开始了超速、高速、低速大容量离心机以及分析用超速离心机的商品化生产
1955年,Anderson发明了区带转头,并用区带离心法首次证明了DNA双螺旋结构半保留复制的假说;
离心技术的发展
1964-1966年,Anderson等开始建立转子区带离心技术并开发了低、高、超速区带转头。
1957-1959年,Meselson、Duve等开发了等密度离心法。
1975年,垂直管转子被开发并用于Dupont-Sorvall油透平驱动的超速离心机。
1981年,美国Beckman公司开发的用于细胞离心纯化的“淘洗”转头供应市场。
……
离心技术的发展