文档介绍：病毒灭活验证报告
文件编号：
编制：
审核：
批准:
日期：
1、目的：确认病毒灭活参数的有效性。
2、范围：原料。
3、验证依据：《血液制品去除／灭活病毒技术方法及验证指导原则》
4、验证项目：在工艺过程中病毒滴定
微量细胞病变法。试验样品经10倍系列稀释后加入已接种细胞的96孔培养板中，每个稀释度做8孔重复。将培养板置37°C二氧化碳孵箱内培养72h（接种PPV的PK-15培养120h）,在光镜下观察细胞病变效应（CPE），根据Karber氏法计算病毒滴度。
免疫荧光染色法检测PPV将PPV接种于PK-15细胞中,培养120h后,用抗PPV荧光抗体对细胞进行直接免疫荧光抗体试验,按照抗体说明书要求进行操作。
细胞盲传病毒灭活后的样品均以高浓度加入细胞中做细胞盲传3代培养,观察是否出现细胞病变。在细胞盲传3代的全过程中,任何时段出现细胞病变均视为阳性(+),说明病毒未被完全灭活;未出现细胞病变视为阴性(-),说明样品中病毒已被完全灭活。
4、4效果的判定判断病毒去除/灭活的有效性须综合考虑，不能仅以病毒去除/灭活的量来确定。在确定有效之前，必须考虑如下因素，审慎评价每次验证结果。．验证试验所选择的病毒是否适宜，病毒验证的设计是否合理。
病毒降低量(loglO)>4ogs,表示该步骤去除/灭活病毒有效。如因检测方法造成
病毒降低量V4logs时，应盲传三代，如无病毒检出，可认定是有效的灭活病毒方法。
病毒灭活动力学可更好的显示病毒灭活的效果。病毒灭活通常不是简单的一级反应。往往是起始反应速率快，其后变慢。如果病毒灭活速率随时间明显降低，表示该方法可能无效，或者残留的指示病毒对该灭活方法有抵抗力，说明该步病毒灭活方法无效。
病毒实际滴度为基础病毒，指示病毒与样品l:9的比例混匀后零点取样的病毒滴度，通过与经去除/灭活病毒后的测定的实际病毒残留量的比较，作为该病毒去除/灭活方法(步骤)实际的灭活病毒的量。
验证要求
。
。
。。
：9。
。
工艺参数的确定
。
。

。
病毒灭活验证最终报告
1、目的：
所有用于医疗器械生产的生物性原材料等都有受到病毒污染的可能性，为验证
“——”的生物原材料-----种猪细小病毒、伪狂犬病毒病毒的感染情况，特进行
下述实验。验证确保生物原材料的安全性。
验证依据：《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》
2、范围：
适用于本公司产品。
3、试验结果如下：

2h以上，连续3次重复试验结果表明，对VSV、PRV、、、（表1）。处理后的样品经细胞盲传3代培养，均未出现细胞病变。结果显示，酸性酶解溶液对胶原蛋白中的病毒具有良好的灭活效果。
表1酸性酶解溶液対腔闻蛋白中的病毒灭