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盐析法公开课获奖课件赛课一等奖课件.ppt

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盐析法公开课获奖课件赛课一等奖课件.ppt

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  盐析法
概念
在高浓度中性盐存在的状况下,欲分离物质在水溶液中的溶解度减少并沉淀析出的现象称为盐析。
一、盐析法原理(蛋白质)
蛋白质在自然环境中一般是可溶的,
表面:大部分是亲水基团
内部:大部分是疏水基团
蛋白质呈稳定的分散状态
两性物质,一定pH下表面带有一定的
电荷,静电斥力作用使分子间互相排斥
蛋白质周围的水分子有序排列,在表面形成水化膜,这一层能保护蛋白质粒子避免因碰撞而聚沉。
1)破坏水化膜,分子间易碰撞汇集。将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子有很强的水化力,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。
盐析机理
2)破坏水化膜,暴露出憎水区域,由于憎水区域间作用使蛋白质汇集而沉淀,憎水区域越多,越易沉淀。
3)中和电荷,减少静电斥力,中性盐加入蛋白质溶液后,蛋白质表面电荷大量被中和,静电斥力降导致蛋白溶解度减少,使蛋白质分子之间汇集而沉淀。
二、盐析常用的盐
常用的盐析用盐重要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、磷酸二氢钠等。实际应用中以硫酸铵最为常用。
由于硫酸铵具有:
②溶解度大且受温度的影响小
③不易使蛋白质变性。
④价格价廉
①离子强度大,盐析能力强。
表1 常用盐析剂在水中的溶解度 单位:g/100mL
盐析所用无机盐的选择原则:

,且溶解度受温度的影响效果小

,价格低廉
盐析效果:阴离子 > 阳离子
尤其以高价阴离子更为明显。
阳离子对盐析效果的影响:
Al3+ > H+ > Ba2+ > Sr2+ > Ca2+ > Cs+ > Rb+ > NH4+ > K+ > Na+ > Li+
常见阴离子的盐析作用次序:
三、影响盐析的原因
盐饱和度的影响:不一样的蛋白质,其构造和性质不一样,盐析时所需的饱和度也就不一样。
蛋白质浓度的影响:一般常将蛋白质浓度控制在2~3%为宜。
pH的影响:进行盐析时的pH,要选择在被盐析的蛋白质的pI附近。
温度的影响:蛋白质的盐析一般在室温下进行