文档介绍：DNA***化研究 张茂雷
主要内容
DNA***化原理
DNA***化的研究方法
***化的生物学作用
问题与展望
DNA***化原理
DNA ***化是指生物体在DNA ***转移酶(DNA methyltransferase ,DMT) 的催化下,以s-腺苷甲硫氨酸(SAM) 为***供体,将***转移到特定的碱基上的过程。DNA***化可以发生在腺嘌呤的N -6位、胞嘧啶的N -4位、鸟嘌呤的N -7位或胞嘧啶的C-5位等在哺乳动物DNA***化主要发生在基因启动子或第一外显子中-CG-(-CpG-)二核苷酸中的C发生***化变成-mCG-
DNA***化研究方法
基因组整体水平***化分析
特异性位点的DNA***化的检测
***化新位点的寻找
基因组整体水平***化分析
高效液相色谱柱(HPLC)
SssI ***转移酶法
免疫化学法
***乙醛法
特异性位点的DNA***化的检测 -亚硫酸氢盐修饰
特异性位点的DNA***化的检测
直接测序法 Bisulfite sequencing PCR(BSP)
***化特异性的PCR(methylation-specific PCR, MSP)
结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法
***化敏感性单核苷酸引物延伸
***化敏感性解链曲线分析
***化敏感性限制性内切酶-PCR/Southern法(不需亚硫酸氢盐修饰)
特异性位点的DNA***化的检测 BSP和MSP法
实验举例
通过BSP和MSP 方法对于前列腺癌 DLC-1基因启动子***化情况进行检测。实验方法及结果:
1在线设计MSP引物(hprimer/)
DNA Extraction
3 DNA Bisulfite Treatment(Active Motif CO.,USA)
4 Bisulfite sequencing PCR
5 Methylation-Specific PCR
1
A