文档介绍：该【基因工程医学知识专家讲座 】是由【海洋里徜徉知识】上传分享，文档一共【123】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【基因工程医学知识专家讲座 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。全国高等医药教材建设研究会
卫生部规划教材
全国高等学校教材
供七、八年制临床医学等专业用
医学分子生物学
Medical Molecular Biology
主编 冯作化
人民卫生出版社 年8月第一版
课件制作：吴耀生(版权全部)
广西医科大学基础医学院
生物化学与分子生物学教研室 .12
基因工程医学知识专家讲座
第1页
第十三章
基因工程与基因体外表示
Gene Engineering and Gene Expression
基因工程医学知识专家讲座
第2页
目标与意义
基因工程医学知识专家讲座
第3页
基本要素
1. 目标基因 (target genes)
2. 工具酶 (tool enzymes)
3. 载体 (vectors)
4. 宿主细胞 (host cells)
基因工程医学知识专家讲座
第4页
Main contents
工具酶
DNA载体
基因克隆过程
真核细胞基因转染
基因改造
克隆基因表示
电子克隆
基本概念及背景
基因工程医学知识专家讲座
第5页
For Example
怎样从植物中克隆法呢基焦磷酸合酶(FPS)?
1. 查资料认识FPS
2. 设计试验方案
3. 可行性分析
基因工程医学知识专家讲座
第6页
For Example
基因工程医学知识专家讲座
第7页
FPS 克隆： RT-PCR， 3'-RACE， 5'-RACE
改进异硫氰酸胍一步法提取三七根部总RNA
RT-PCR扩增fps部分保守序列
3’-RACE 及克隆测序
5’-RACE 及克隆测序
序列拼接
基因工程医学知识专家讲座
第8页
mRNA: 5’ AAAAAA3’
TTTTTTT-接头
cDNA:
Oligo dT接头
基因特异性引物
3’ Full RACE原理图
基因工程医学知识专家讲座
第9页
5’ Full RACE原理图
(1)
P
5’-端磷酸化RT-Primer
未知区域
已知序列
Target mRNA
AAAAAAAA-----
5’
AAAAAAAA-----
5’
P
未知区域
逆转录
RNA分解
P
未知区域
未知区域
S1
A1
S2
A2
1st PCR primers
2nd PCR primers
用RNA ligase进行环化或形成首尾连接物
未知区域
1stand 2nd PCR
5’-端磷酸化RT primer部位
包含未知5‘上游区域扩增产物
(2)
(3)
(4)
基因工程医学知识专家讲座
第10页