文档介绍：当归补血汤对荷瘤小鼠化疗后免疫功能的影响论文
.freelide,CTX)化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法建立S180荷瘤小鼠模型后,随机分为4组,荷瘤对照组、CTX组、当归补血汤+CTX组及当归补血汤组。 ,CTX)化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响,旨在为该方的临床应用提供一定实验依据。
1 材料与仪器
动物及细胞株
清洁级昆明小鼠,7~9周龄,雌雄各半,体质量18~22g,由河北医科大学实验动物中心提供,许可证:SCXK(冀)2003-1-003。动物在实验前适应性驯养1周。饲料和垫料由河北医科大学实验动物中心提供。实验期间自由采食饮水。腹水型S180瘤株由河北医科大学实验动物中心提供,L929细胞株由北京市中医研究所提供。
药品
当归补血汤由黄芪和当归组成(饮片由河北大学附属医院中药房提供,所有药品均经中药专家鉴定),将上述药物加水浸泡20min后,煎煮3次,约30min/次,3煎溶液混合过滤,取汁300ml,离心取上清,80℃,分装,高温消毒后置于4℃冰箱保存备用。化疗药物:注射用环磷酰胺,江苏恒瑞医药股份有限公司(批号:06112021)。
试剂及仪器
DMSO(Amresco公司产品),四氮甲唑蓝(MTT,Amresco公司产品),刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司产品),RPMI-1640完全培养基(Amresco公司产品)。酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司产品),CO2培养箱(上海福玛实验设备有限公司产品),超净工作台(苏净集团,苏州安泰空气技术有限公司产品),倒置显微镜(南京江南永新光学有限公司产品)。
2 方法
动物模型的建立[2]
无菌条件下抽取6~7 d生长良好的S180小鼠的腹水,按1∶3比例用生理盐水稀释,反复冲打,充分混匀,在显微镜下计数,×107/ml,。瘤株接种前,%台盼蓝染色,计算活细胞数为95%~98%。从抽取腹水时开始,到移植完最后1只小鼠的总时间控制在1 h内。
分组及给药
小鼠接种24 h后按体质量和性别随机分成荷瘤对照组、CTX组、当归补血汤+CTX组和当归补血汤组。荷瘤对照组均用生理盐水灌胃,同时腹腔注射生理盐水,单纯化疗组腹腔注射CTX g·kg-1·d-1,同时用生理盐水灌胃,当归补血汤+CTX组腹腔注射CTX g·kg-1·d-1,同时用当归补血汤12g·kg-1·d-1(按生药量计算,剂量由预实验得出)灌胃,当归补血汤组用当归补血汤12 g·kg-1·d-1灌胃,同时腹腔注射生理盐水, ml/只, ml/只,各组于瘤细胞接种第2日开始用药,1次/d,连续10 d。
脾脏、胸腺指数
小鼠脱臼处死,以无菌操作取下脾脏、胸腺,电子天平称质量并计算脏器指数。
腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定[3]
小鼠脱臼处死,75%酒精中浸泡2 min,置超净台。每只小鼠腹腔注射冷PBS液10 ml,轻揉腹部2 min,回抽腹腔液,离心弃上清。RPM1-1640培养液洗两次,计数并调节