文档介绍：大肠杆菌O157: H7实验诊断研究进展
大肠杆菌O157: H7感染临床表现
出血性肠炎:鲜血样便,腹部痉挛性疼痛,低热或不发热。
溶血性尿毒综合征(HUS):主要发生在儿童,常出现在腹泻后数天或1-2周。病死率一般在10%,各别可高达50%。
血栓性血小板减少性紫癜(TTP):主要发生在成年人,尤其老年人。病人主要表现为发热、血小板减少、溶血性贫血、肾功能异常等症状,病情发展迅速,病死率高,有时可出现70%的病人死亡。
大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经
大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌,可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。
在实验室,大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、兔、猪、牛等动物。
大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题
我国情况也不容乐观
一、细菌培养与鉴定

早期培养对确定病原有重要意义。
培养的对象首先是急性血性腹泻患者,其次是HUS、TTP等住院病人,再其次是高危接触者。
培养基:
山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂
改良的伊红美兰、改良的SD-39(MSD)琼脂
添加了头孢克肟和亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂(TC-SMAC)
添加了头孢克肟和鼠李糖(%)的山梨醇麦康凯琼脂(CR-SMAC)
“科玛嘉”大肠杆菌O157: H7显色培养基
四溴荧光亚***兰琼脂
H7抗血清—山梨醇发酵培养基
增菌液:
含10mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液
含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白胨大豆肉汤
新生霉素MEC肉汤
月桂基胰蛋白胨肉汤
加入下例任何一种抑制剂均可增加培养基的选择性
头孢克肟
新生霉素10mg/L 万古霉素40mg/L

免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附于一种能被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反应特性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。
方法:;: H7免疫磁珠20ul;;;;,重复3-5过程;,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C-头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃培养6-24小时,挑取可疑菌落进行鉴定。

目前许多国家使用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交叉反应。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。
典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下:
动力试验(+) 葡萄糖(+) 麦芽糖(+)甘露醇(+) 蔗糖(-/+) 硫化氢(-) 尿素(-) 靛基质(+) ***红(+) V-P试验(-)枸橼酸盐(-)苯丙氨酸脱羧酶(-)赖氨酸脱羧酶(+/-)鸟氨酸脱羧酶( +/ -)氧化酶(-)***化钾(-)
与O157有鉴别意义的生化反应见表1。
MUG即4-***伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株则不水解MUG。Thompson等建立了一种快速MUG试验,取 ,以无菌棉签挑取待检菌纯培养物混匀于其中,℃置20min,暗室内高强度光源下观察结果,产生蓝色荧光者为阳性。

2. 胶体金免疫技术
3. ELISA

6. 间接血凝分析(IEHA)
7. 全自动抗原抗体检测系统
8. 免疫印记法