文档介绍：目的: 西妥昔单抗(Cetuximab)是一种人鼠嵌合型 IgG 单克隆抗体,可
与细胞表面的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 特异性结合,竞争性地阻断表皮生长因子和其配体的结合,从而阻断肿瘤细胞增殖、转移、侵袭以及血管生成等生物学效应。Cetuximab 与部分化疗药物或放射线对不同种类的肿瘤细胞具有协同杀伤的效应,降低不同种类肿瘤细胞对 Cetuximab 的抵抗性,提高对 Cetuximab 的敏感性。本研究拟通过观察西妥昔单抗联合顺铂、放射线诱导人喉鳞癌细胞株 Hep-2 的增殖、凋亡及细胞周期的影响,探讨西妥昔单抗与顺铂、放射线联合应用对 Hep-2 细胞的杀伤效应及对其调控机制的初步探讨。
方法: 1、体外培养人喉鳞状细胞癌 Hep-2 细胞株,取对数生长期的细胞进行试验。
2、K-8 试剂盒(cell counting kit-8)分别检测不同剂量的西妥昔单抗、顺铂、放射线对人喉鳞癌 Hep-2 细胞的 12h、24h、48h、72h 生长抑制率。
3、实验组分别给予西妥昔单抗 1036μg/ml,顺铂 3μg/ml,放射线 4Gy, 顺铂 3μg/ml+放射线 4Gy,西妥昔单抗 1036μg/ml+顺铂 3μg/ml, 西妥昔单抗 1036μg/ml+放射线 4Gy,西妥昔单抗 1036μg/ml+顺铂 3μg/ml+放射线 4Gy,同时设立阴性对照组(不添加任何药物),分别作用于人喉鳞癌 Hep-2 细胞株 24h,K-8 试剂盒检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测不同干预方案对 Hep-2 凋亡率及细胞周期分布情况。
结果: 1、不同剂量的西妥昔单抗、顺铂、放射线对 Hep-2 细胞均有抑制作用,并在一定浓度范围内呈时间-剂量依赖性,24h 半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)分别为西妥昔单抗 、顺铂 、放射线 ;Hep-2 细胞对西妥昔单抗的生长抑制作用较敏感。
2、顺铂,放射线分别与西妥昔单抗联合应用时对 Hep-2 细胞的生长抑制率
显著高于顺铂、放射线单独或联合应用(P<),具有协同杀伤效应。
3、经西妥昔单抗与放射线、西妥昔单抗与顺铂联合作用 24h 后处于早期凋亡阶段的 Hep-2 细胞分别为(±)%、(±)%,显著高于阴性对照组与放射线、顺铂的单独或联合作用组(P<),提示西妥昔单抗对顺铂或放射线在体外诱导人喉癌 Hep-2 细胞株的凋亡具有显著的协同作用。
4、单药西妥昔单抗组中 S 期细胞所占比例较阴性对照组比例显著增高
(P<);西妥昔单抗+放射线组(P=),西妥昔单抗+顺铂+放射线组
(P=)中,G0/G1 期细胞所占比例明显高于单纯放射线组。
结论: 1、人喉鳞癌 Hep-2 细胞株对西妥昔单抗诱导的细胞凋亡敏感,在一定浓度范围内呈时间和剂量依赖性。
2、顺铂和/或放射线与西妥昔单抗联用能显著提高对 Hep-2 细胞的生长抑制作用,对 Hep-2 细胞的增殖具有协同抑制效应。
3、西妥昔单抗与顺铂或放射线联用能显著提高 Hep-2 的凋亡率,提示西妥昔单抗对顺铂或放射线在体外诱导人喉癌 Hep-2 细胞株的凋亡具有显著的协同作用。
4、西妥昔单抗可以通过将 Hep-2 细胞阻滞在细胞分裂的 S 期达到抑制细胞分裂阻止其增殖失控的作用。西妥昔单抗与放射线联用亦可使人喉癌 Hep-2 细胞株阻滞在对放射线敏感的 G0/G1 期,体外可显著诱导细胞凋亡,从而对放射线具有较强的协同作用。这可能是顺铂、放射线与西妥昔单抗联合应用对 Hep-2 细胞发挥协同效应的机制之一。
【关键词】喉肿瘤;西妥昔单抗; 联合放化疗; 细胞凋亡; 协同作用
Synergistic effects and mechanisms of EGFR-blockade by bined with chemotherapeutic and / or radiotherapy in laryngeal squamous carcinoma cells Hep-2 in vitro
Abstract
Objective Cetuximab is a mouse-human chimeric IgG monoclonal antibody, specific binding with the cell surface of epidermal growth factor receptor (EGFR), competitivel