文档介绍：中文摘要
目的:(1)探讨柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化。(2)探讨内臵氯化锌致股骨头缺血性坏死的机制及可行性。(3) 探讨柚皮甙诱导 BMSCs 复合同种异体松质骨载体在兔体内修复坏死股骨头的作用机制。(4)为柚甙成为新药提供理论支持。
方 法:体外实验:以新生兔的第三代骨髓间充质干细胞为研究对象, 对其进行体外分离、培养、鉴定, 掌握骨髓间充质干细胞的一般生长规律及环境。随后取同批骨髓间充质干细胞扩增至第三代后种植于 12 孔板, 分别用柚皮甙诱导液、成骨诱导液、柚皮甙成骨诱导液诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,同时设立空白对照组;取成年兔髂骨脱蛋脱脂处理后,检测其生化指标,以备用。同种体内实验:以 - 公斤的新西兰大白兔为研究对象,经股骨颈骨隧道臵 、 mg 的氯化锌入股骨头内致缺血性坏死,待造模稳定后。选同批号 - 公斤新西兰大白兔 21 只分 5mg、、 mg 三组,所有动物均右侧造模,左侧空白对照进行实验研究,于第 2、14、28、42 天拍摄 x 线片、处死做组织病理学切片,确定致股骨头坏死的最佳剂量及坏死与修复的临界点及最佳内臵剂量。待造模成功后,选同批号 - 公斤新西兰大白兔 20 只以最佳内臵剂量为标准统一造模,3 周后刮除坏死灶,分别植入单纯松质骨载体(对照组)、BMSCs 复合松质骨载体复合物(实验组),空白组进行实验研究。分别于术后第 4、8、12 周拍摄 X 线片、处死做组织病理学观察, 用 统计软件对相关项目进行统计学分析。
结果: ① BMSCs 轮廓呈长梭形,少量细胞呈星形,胞浆丰富,常有 1-2 个细胞核,位臵居中成成纤维样生长。消化传代后,细胞透亮呈圆形,2-4 小时后贴壁生长,变成短梭形,1-2 天后细胞贴附于培养瓶底, 呈长梭形分散排列。可向多方向诱导分化,经诱导的细胞生长旺盛,形体饱满,体积逐渐增大;柚皮甙诱导 3 周后,培养的细胞呈现碱性磷酸
酶、钙化结节和 I 性胶原免疫组织化学染色阳性反应。成骨诱导液与柚皮
甙在诱导 BMSCs 向成骨分化方面没有明显的差异性(P>),成骨诱导液复合柚皮甙亦无明显的增强或减弱;② 氯化锌在臵入 1 周后骨细胞开始坏死,4 周时坏死的骨小梁表面及坏死骨周围有大量新生骨形成,新生骨、坏死骨相混杂,新生骨内细胞胞浆丰富,胞核大,说明其代谢非常活跃。比较符合人类股骨头坏死的病理过程;③支架材料三维孔隙结构保留完好, 材料的孔径约为 300μm,孔隙率约为 %。具有原始骨组织的三维结构,为细胞的的生长提供了一个利于细胞黏附、增殖、分化及诱导的正常表达场所。BMSCs 不仅能与生物骨衍生支架黏附, 而且能在支架上分裂、增殖,体现了良好的生物相容性和细胞-材料界面作用。④植入支架材料 8 周后周边新骨带明显增宽,成骨反应向中心部推进,植入物表面有大量骨痂形成,与骨端连接紧密,少部分标本形成连续性骨桥。12 周,部分充填区被幼稚的骨小梁所占据,部分充填区广布相对成熟的骨小梁,但较正常骨小梁粗、排列不够规则,骨痂形成, 可见植入物完全骨化,缺损区完全被新骨代替。
结 论: ① BMSCs 在不同的诱导剂作用下,可向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化。在向成骨细胞分化的过程中,分化的细胞富含碱性磷酸酶,能合成Ⅰ型胶原表达素和骨桥蛋白,并可形成钙化结节。②氯化锌在腔室内溶解,能够杀灭渗透区域内的成骨细胞及骨髓细胞,可造成一定区域的骨坏死,再现股骨头坏死后的一系列病理生理过程,可造一定区域性骨坏死病理模型。③备的同种异体脱蛋白、脱脂松质骨载体, 材料来源广泛、生物学性能稳定,具有天然的生物孔架结构,细胞粘附性好,与细胞共同培养过程中显示了良好的生物学性能。④经柚皮甙诱导后的骨髓间充质干细胞复合同种异体松质骨载体可修复缺血性股骨头坏死。
关键词:骨髓间充质干细胞;股骨头;缺血坏死;柚皮甙
Experimental study on the treatment of the rabbits’ aseptic necrosis of the femoral head with Naringin induced bone mesenchymal stem cells
Abstract
Objective: This study concentraits on four objectives. First, to examine wether the naringin can lead bone besenchymal stem cells to different osteoblast direction or not. Sec