文档介绍：兰州理工大学
硕士学位论文
人胰岛素原基因的设计、分子克隆、构建及其对马铃薯的遗传
转化
姓名:马雪青
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:马建忠
20100430
摘要糖尿病是继心血管疾病、癌症之后致残率、致死率最高的第三大疾病,世界卫牛组织已将防治这一疾病列为全球保护人类健康的重要问题之一。胰岛素足治疗糖尿病的最有效的药物。现在使用的胰岛素多是通过细菌或酵母表达系统得剑的,相对于大量普通糖尿病人群及其需终身用药而言,其生产成奉仍然较高,从而限制了胰岛紊的广泛应用。而利用植物生产胰岛素口有效的弥补这一不足。囚此,本实验构建了含人胰岛素原基因的植物表达载体,并经农杆菌介导转化屿铃薯晶种大西洋,为人胰岛素原摹冈在马铃薯植株,表达奠定了基础。主要研究结⒖寺×寺砹迨砜榫プㄒ恍云舳觩舳踊,经测序分析,该克隆片段为,包含有增强子、絅转录起始点序列。与泄ú嫉囊阎P蛄サ腎一源性。⒏菔欠窈行藕烹幕颍至韋杓坪铣闪舜蠳囟盖形坏愕条引物,亚克隆了舳樱⒂,得到鲋刈樽缓藕烹和藕烹。⒏萋肓迨淼钠ò苈肓撕虶中人胰岛素原的氨基酸序列,并在人胰岛素原序列的前面加入酶切位点,后面加上终止密码子和的酶切位点,改计合成了人胰岛素原基因,并与载体连接,得剑重组子⒐菇撕琾舳佑肴艘鹊核髟舻闹参锉泶镌靥錚藕烹和藕烹。通过冻融法,将构建好的表达载体导入农杆菌菌株璓鉴定,获得了转化菌株。⒁源笪餮蟆⒎盐谌鹚⑾牟ǖ俸透逝┦号致砹迨硎怨苊巛范挝2料,┦弓。/,/。/;夏波蒂为硕’产伊沦史果如罚。籉狹//.疞疞籅/籅
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一英文缩写词表量量皇曼曼曼曼曼皇曼毫曼量量蔓曼曼璺量曼曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼量曼舅舅英文缩写英文全称转中文名称氨苄青霉素乙酰丁香酮碱基对羧苄青霉素花椰菜花叶病毒启动子头孢霉素脱氧核糖核苷三磷酸溴化乙锭乙二胺四乙酸赤霉素咸侨┧崦潮霉素磷酸转移酶潮霉素卡那霉素培养基萘乙酸光密度聚合酶链式反应利福平十二烷基磺酸钠撼逡缓冲液三羟甲基氨基甲烷玉米素..∴.
钐纪易穆茜易醺学位论文版权使用授权书日期:彻口年各月衫兰州理工大学学位论文原创性声明日强:獬口年痪日日期:扣/法律后果由本人承担。容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的作者签名:本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权兰州理工大学可以将本学位论文的全部或部分内和汇编本学位论文。本学位论文属于⒈C芸冢年解密后适用本授权二挡。⒉槐C躣。朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭导师签名:舌月
第绪论糖尿病的现状及治疗药物胰岛素界卫生组称为不死的癌症。世界卫生组织己将防治这一疾病列为全球保护人类健的功能。吞悄虿』颊叩囊鹊核夭⒎峭耆ナВ捎谑芤糯ā⒎逝帧⒛炅浼耙糖尿病是多种病凶引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱,是由于体内胰岛素绝对或市匀狈虬凶橹砸鹊核夭幻舾卸鸬淖酆喜≈ⅰK腔肪澈鸵糯两个因素长期共同作用的结果。随着人类生活水平的提高,糖尿病的发病率逐年增加。年全球糖尿病患病人数约为亿,估计到辏疾∪耸ù.亿,年将增加至凇T谔悄虿∪巳褐蟹⑸谛牟⑷毖P曰虺鲅P阅匝管病、失明、肢端坏疽等严重并发症均明显高于非糖尿病人群。因此,糖尿病及其并发症己成为严重威胁人类身体健康的世界性公共卫生问题。临床观察统汁证实,糖尿病足继心血管疾病、癌症之后致残率、致死率最高的第三大疾病。糖尿病因