文档介绍：60-医学检验系临床免疫学教研室
医学检验系临床免疫学教研室 shiying@ 实验原理在抗原刺激下可以使机体产生相应的抗体,由于抗体通常存在于血清中,因此也将机体受到抗原刺激后的血清称为免疫血清,免疫血清中含有对应于该抗原的多个决定簇的多种抗体―即多克隆抗体。实验原理抗血清的制备分为三个步骤: 抗原的制备与纯化动物的免疫(注射途径、注射次数、间隔时间等) 血清分离纯化与效价鉴定试剂与器材抗原与免疫对象细菌菌种(伤寒沙门菌O901)、健康家兔。试剂生理盐水、麦氏比浊管、石炭酸、防腐剂(%%硫柳汞)等设备与器材剪刀、镊子、注射器、试管等器材和冰箱、离心机等设备实验方法伤寒杆菌O抗原的制备取经革兰染色做细菌纯度鉴定的伤寒沙门菌,密集划线接种于普通琼脂平板,37℃培养24~48小时; 用生理盐水将细菌菌苔洗于清洁、无菌的三角烧瓶中,置60℃水浴或隔水煮沸1小时使细菌的菌毛破坏(破坏H抗原); 3. 将菌液移入离心管4000r/min离心10min,弃去上清,并用无菌生理盐水洗涤2次; 4. 取少量处理过的菌液再次接种于琼脂平板上进行无菌实验(37℃,24h),确定无活菌后用生理盐水调整菌液浓度至109个/ml,%,即为细菌O抗原。实验方法伤寒杆菌H抗原的制备取有鞭毛的伤寒杆菌密集划线接种于普通琼脂平板上,37℃培养24~48小时; 取出培养板,用含有5%石炭酸(苯酚)的生理盐水洗下琼脂平板上的菌苔,移入无菌三角烧瓶中,置37℃水浴24h(或4℃3~5天固定杀菌); 做无菌试验,用生理盐水稀释成10*9个/ml,即为细菌H抗原。免疫日期(天) 免疫途径抗原免疫剂量(ml) 1 () 多点皮内伤寒杆菌O或H抗原 6 () 静脉伤寒杆菌O或H抗原 11 () 静脉伤寒杆菌O或H抗原 16 () 静脉伤寒杆菌O或H抗原 19 () 静脉伤寒杆菌O或H抗原实验方法免疫方案实验方法抗血清获取试血:末次免疫7d后试血,试血一般耳静脉或心脏采血,分离血清与伤寒沙门菌O或H抗原做试验管凝集试验,凝集效价(滴度)在1:1600~3200之