文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
GAcDNA反义真核表达载体的构建及对胃癌细胞生物学活性的影
响
姓名:刘宏鸣
申请学位级别:硕士
专业:外科学(普外)
指导教师:顾红光
20040501
论文作者签名:左礽塾论文作者签名:壶茇降嫒掌冢河茫喝生兰第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书指导教师签名:期:┥豪导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
英文缩写一览表氨苄青霉素英文缩写英文全称中文全称凋亡指数反义寡核苷酸二甲基亚砜脱氧核糖核酸脱氧核苷三磷酸溴化乙锭微量离心管胎牛血清谷氨酰胺酶谷氨酰胺多克隆位点信使光密度磷酸盐缓冲液程序性细胞死亡聚合酶链式反应大肠杆菌乙二胺四乙酸甘油新霉素小时培养基分钟毫升聚乙二醇增殖细胞核抗原第三军医大学硕士学位论文甤
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┫赴株,发现肿瘤细胞的增殖能力减弱,肿瘤细胞的凋亡指数增加,提示肿瘤细胞恶性程目的:利用反义核酸技术封闭胃癌细胞的谷氨酰胺酶基因,观察反义能否对胃癌细胞的恶性表型有所逆转,为肿瘤的基因治疗探索一条新途径,也为后续研究及临床应用奠定基础。方法:ü侍褰榈甲H胛赴┫赴鸖.,经筛选、鉴定,命名为埃偻ü齅法测定该细胞生长曲线,采用免疫组织化学方法—检测肿瘤细胞增殖细胞核抗原表达情况,采用ḿ觳庵琢鱿赴赴亡情况,观察反义核酸转染后胃癌细胞生物学活性的改变。獹畏聪虿迦氲秸婧吮泶镌靥錺,/。畃畂/通过脂质体介导转染胃癌细胞琍证实啊甅法测定细胞生长曲线,“生长速度减慢。说明肿瘤细胞的增殖活性在实验条件下明显减弱。觳馕赴┫赴牡蛲銮榭霰砻髦刈橹柿WH竞骃一的粜韵胞数量显著上升,与对照组比较,差异显著。本实验通过含有结果:目的片段已经整合到了赴蜃椋竦玫抗性细胞命名为畃畂/转染赴┫赴蟪鱿諴泶锝隙哉兆橄灾陆担结论:第三军医大学硕士学位论文
度有所降低,反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶基因可能成为肿瘤基因治疗的一条新途径。关键词:谷氨酰胺酶:谷氨酰胺;真核表达载体;反义核酸:增殖细胞核抗原细胞凋亡:基因转染第三军医大学硕士学位论文
反义真核表达载体的构建及对胃癌细胞生物学活性的影晌刖术,该技术是利用反义核酸以序列特异性方式与靶ü罨ゲ古涠缘脑恚反义基因转染后肿瘤细胞的生物学特性发生改变的相关报道。本研究首先利用标准的反义核酸技术是继基因克隆和重组技术后的分子生物学领域兴起的一种全新技使反义核酸参与基因的表达调控,达到控制和治疗肿瘤的目的,因其调控基因表达具有高度选择性与高度特异性,所以该技术已成为肿瘤基因治疗的一个研究热点⋯。谷氨酰胺酶,侵琢鱿赴霉劝滨0珿泄劝酰胺酵解的起始酶和关键酶匏倜口】,把纸獬晒劝彼和氨是肿瘤细胞的主要呼吸燃料和重要的氮源,是肿瘤细胞线粒体氧化的底物。肿瘤细胞的生长依赖捌渲屑浯徊如:谷氨酸、乳酸、脯氨酸、氨等琢鱿赴与肿瘤消耗收喙亍K孀判陆麲虻纳钊胙芯浚庥行┭д摺氲郊然活性直接影响肿瘤细胞内坏幕钤境潭龋珿钚钥赡苡胫琢鱿赴纳长和恶性程度相关,那么封闭基因就完全有可能阻断肿瘤细胞内谷氨酰胺酵解,进而影响肿瘤细胞的生长和增殖等生物学特性。如果这种判断成立,这就为肿瘤治疗开辟了一条新的途径。反义基因能否抑制胃癌细胞的恶性表型尚不清楚,ü体介导转入胃癌细胞秆⒓ǎ猄一,再通过