文档介绍：中国协和医科大学
博士学位论文
PAP蛋白重级表达载体的构建及在原核和真核细胞中的表达
姓名:李果
申请学位级别:博士
专业:分子生物学和生物化学
指导教师:袁建刚;强伯勤

中文摘要由人免疫缺陷病毒琀鸬艾滋病巫,拘郧浚∷率高,目前缺乏有效的治疗手段,已成为严重威胁全人类健康的社会问题。从天然动植物中筛选抗的药物是目前国际上的一个热点研究领域。属于核糖体失活蛋白猧,纳陆抗病毒蛋白琍崛∽訮砂R的单链蛋白质,其已被证明在级浓度下即能有效抑制母粗啤6鳫反式激活因子—琓茉强蜃B嫉钠鹗己脱由煨剩贖的致病过程中起着重要的作用,是一个理想的抗腥咀饔玫陌斜辍4嬖谟诙嘀植《镜鞍字手械蛋白转导域,具有能将细胞因子或毒素蛋白直接介导入细胞的作用。在美洲商陆植物中分离得到的存在三种抗病毒蛋白—中,来源于叶片的狪抑制钚宰钋俊1臼笛槭页晒Υ又泄陆植物叶片中分离克隆出了一种能有效抑制钚缘亩嚯狪基因,编码区长度嗦个氨基酸的蛋白质ɡ昵牒牛S行У腡突变体能同体内腡竞争性地结合感染细胞中蜃長中的顺式作用元件佣种艸基因的转录。本实验室前期的工作共获得的腡窒孕愿和槐涮卜蠱蚆哂邢灾囊种艸的作用。本实验通过际跬
成了词阶饔眉せ钜蜃覶与中国商陆抗病毒蛋白、鞍鬃5加胫泄搪娇共《镜鞍椎幕蛑刈椋τ每焖偻槐浼际豕菇蠺的疞疉以及的显性负突变体。将上述串联基因连入了原核表达载体诖蟪Ω司菌株中用诱导实现了谋泶铮ü鞒龅奶跫成功以纯化了表达的ü肝鲆越细叩幕厥章式辛说鞍椎母葱浴同时,将上述串联基因插入甲醇酵母表达载体,应用电转将重组基因转入了巴斯德毕赤酵母闟,并在较高ǘ认鲁晒ι秆〕龈呖剐缘亩嗫奖淳辍R约状加盏迹筛选出了有效分泌表达木辍4佣迪至酥刈镻在大肠杆菌和酵母中的成功表达,为下一步重组蛋白抗病毒活性测定打下了基础。
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在级浓度下纯捎行б种艸的复制,而且对于耐受叠氮胸苷前言功分离得到了这种后来确定为的蛋白质一商陆抗病毒蛋白人们从细菌的产物中发现了治疗致病菌感染的有效物质,从而从根本上逆转了我们在同致病菌的较量中的不利地位。现在抗生素的使用已经成为最有效的非外科保守治疗手段。目前,快速传播并病死率高的的化学治疗尚仅能短期抑制粗疲《疽子诓鸵┬裕治疗的毒副作用大;病毒变异快也使特异的疫苗制备困难重重。白天然动植物中筛选抗的药物是目前国际上的一个热点研究领域。核糖体失活蛋白甶,且焕嗑哂抑制细胞蛋白质合成,并具有抗病毒活性的蛋白质,且已被证明其中至少有郣哂忻魅返目谷死嗝庖呷毕莶《琀钚浴辏嗣欠⑾置乐奚搪街参泻锌山档脱滩莼ㄒ恫《感染性的抗病毒因子,瓿琍K粲诤颂翘迨Щ畹鞍,械囊恢郑笛橹っ鳎琍的抗病毒的能力也不限于植物病毒,对于许多动物病毒包括加泻芮康抑制作用。而与其他比较显示,哂懈叩囊种艸活性,的腥鞠赴杂泻芮康囊种谱饔茫夜舴从锨帷M盤作猧
为免疫毒素在血液系统肿瘤中的应用也具有高效抑制肿瘤细胞、对正常细胞毒性小的优点,近年来更是通过将胂赴砻媸芴迮涮缂に交联,将其应用到实体肿瘤的治疗中。騮编码的反式激活因子猘,,能增强基因转录的起始和延伸效率,在虏」讨衅鹱胖匾5淖饔谩R此鞍资抢硐氲目笻感染作用的靶标。有效的槐涮迥芡内腡竞争性地结合感染细胞中蜃長中的顺式作用元件佣种艸基因的转录。本实验室在过去的研究工作中获得了帜芄灰种艸活性的孕愿和槐涮澹渲腡/一疉以及籐的突变体被证明其抑制作用最显著。构建“孕愿和槐涮保考虑此重组蛋白质进入腥鞠胞后,是否具有发挥孕愿和槐涮逋琀基因组<岷系陌向和抑制转录活性,同时发挥芩釮病毒基因组的可行性。蛋白转导结构域,是近年来发现的一类能将细胞因子或毒素蛋白直接介导入细胞的一类功能结构域,已发现其存在于果蝇触角蛋白、单纯疱疹病毒蛋白、腡蛋白中。腡蛋白的挥诘话被岵谢为一碱性氨基酸的富集域。通过构建“敝刈榛颍衫肞的转导作用增强哪诨岣咂淇共《拘Ч
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