文档介绍：复旦大学
博士学位论文
HIV-1 p24和gp41融合基因载体的构建以及融合蛋白在原核细胞
中的表达
姓名:蒋卫民
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:翁心华
20040415
中文搐要第一部分鞍妆嗦肭虮湟煨缘难芯恳约皃蛋白和蛋白编码区基因片段的获得特异性抗体和特异性细胞免疫,并有较好的安全性嘲。但是目前单一的多肽疫苗背景:艾滋病是諹匚:θ肜嘟】档拇静,目前函际嗖捎繁殖,对免疫系统进行破坏”’。且延冒汗螅幸欢ǖ母弊饔茫⒁撞耐药“6刂艸感染的根本措施在于疫苗的研制”6嚯囊呙缡怯萌斯ず铣刹生的蛋白稳定片段在黑猩猩体内诱导抗闹泻涂固6嚯囊呙缬牒怂嵋呙一样是目前呙缪芯拷鲜苤厥拥牧煊蛑。年美国ú剂肆街病毒多肽疫苗,对人体进行的临床实验结果证实两种多肽能刺激机体产生抗原性较差,产生的中和抗体较弱,无保护及治疗作用,而复合性多肽疫苗具有感染者的基因亚型分析发现,我国的以切臀V鳎珼直接测序发现其各自的空间构象无改变,结合位点仍然存在,为线性中和表位。因此,用基因重组技术将蚲蛑刈楣菇ㄖ柿#⒃诖蟪Ω司懈咝П泶锶诤系鞍籫А=徊蕉锸匝椋兄浦瘟菩砸呙缣峁┗ 1究翁夤卜秩糠帧目的:用—椒ɑ竦肏一蛋白编码区基因片段以及截短体蛋白编码区基因片段。了解我国腥菊遬蛋白编码区的基因变异情况。带有酶切位点的引物,用巢式椒ɡ┰龀鏊枰5哪康幕蚱危碇高效抗逆转录病毒治疗眉膊。瑃茉诙唐谀诮ú《驹亓靠刂圃诤低的水平,病人的免疫功能很快恢复,从而可以延长病人的生命”5ú∪颂迥的病毒尚不能完全清除,一旦条件成熟,这些病毒又会释放到血液中,并且复制较强的抗原性,必将成为新的候选疫苗【俊Müü砑治觯琾一融合蛋白表达后,方法:抽提腥菊哐=凶艿腞,反转录成互补的杓第
,截短体基因片段连接到籘凝胶电泳验证,并进行锏拇炕J褂肈测序仪直接测序;应用热砑孕蛄薪斜榷约敖鞣治觥结果:份局菸狟亚型,菸狝亚型;与共享序列相比,例均为ィ谒斜湟煳坏阒芯捶⑾諫一的过度突变;切湍诘幕蚶肷文献报道,编码区则高度保守。琼脂糖电泳显示蚱蜳产物条带与所要扩增片段相吻合。方法:将┰,再其中%,%,鼳亚型发生核苷酸改变的位点比例平率平均为%,切湍诘幕蚶肷⒙势骄.%,⑸被改变的比例为%~%,平均为%;进化树分析表明在我国河南地区感染切投辔S胩┕晗嘟腂’亚型。猯嗦肭韵喽员J亍6目的:用基因重组技术将基因以及基因的截短体重组连接,构建重组表达质粒。、猒靥逯校庑蜓橹ず螅粞〕龊心勘昊虻恼房寺 H缓将瘟拥絧猅载体中,尉盖泻罅拥絞囟烫寤蛩诘膒将连接后的两个基因酶切,重新连接到表达载体中,经酶切验证和测序验证均证明两个基因已经正确连接到终载体中,并且保证了读码框的正确。结果:籫诤系鞍椎谋泶镌靥錺菇ǔ晒Γ盖醒橹ず筒庑蜓橹亚型的嗦肭蟹⑸。’第
结论:融合蛋白籫梢栽趐泶镌靥逯斜泶铮V瘟菩砸呙绲难兄关键词:人类免疫缺陷病毒;目的:在大肠杆菌中表达融合蛋白一,并经方法:将终载体转化大肠杆菌,经毂瓸一硫代半乳糖吡喃糖苷盏迹在大肠杆菌中得到表达。并经结果:融合蛋白籫诖蟪Ω司斜泶铮璚验证确实。打下基础。基因;验证。验证表达正确。蛋白表达;第
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逆转录酶抑制剂,联合两个核苷类逆转录酶抑制剂。龊塑绽嗄孀B济㈣。治疗性疫苗就是将病毒抗原的重组表达载体导入人体内【】,使在㈨,使得体内剖仙《驹亓肯陆担⑾允玖己玫哪褪苄浴俊V染者人数已逾百万,进入快速增长期。煞治6停碒虷,刖吾人受到感染,由于没有特效药,已经有万人死亡。在我国,感以土餍凶罟恪璊,我国也主要为汀属于逆转录病毒,目抑制剂。这三类疗法可以在短期内将病毒载量控制在很低的水平,病人的免清除,一旦条件成熟,这些病毒又复制繁殖,释放到血液中,对免疫系统造成破坏【G襀费用昂贵,有一定的副作用,并易产生耐药。控制本病流行的根本措施在于有效疫苗的研制R呙绨雌涔δ芸煞治Tし佬砸呙苗称治疗性疫苗【薄W源旯噬峡J佳兄瓢滩『蜓∫呙缫岳矗机制承拗鞫訦的免疫应答不够了解以及湟熘甑牟欢铣鱿炙体内产生病毒抗原而激发机体产生针对这种抗原的保护性体液免疫及细胞免疫【U庵帜谠葱钥乖嗨萍醵净钜呙绲目乖治耷痹谥虏〉奈O招疗性疫苗与S每赡芏訦进行有效的清除‘】【埃蚪行蚬人类免疫缺陷病毒琀堑贾掳滋病的病毒,自上世纪年代被发现以来全世界已经有万前国际上多采用高效抗