口蹄疫a型抗体液相阻断elisa作业指导书.doc

文档介绍：作业指导书
第二章

口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA
作业指导书
SQSYK-ZYB-004-
第一版第0次修改起草人:
2011年04月日颁布、实施

试剂盒来自中国农业科学院兰州兽医研究所,适用于A型口蹄疫抗体检测。
2. 器材准备
:5-50ul移液器、-10ul移液器、50-200ul移液器、50-300ul移液器各一把。
。
:微量血凝板(U型、V型均可)5块,试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释和抗原抗体反应。
,无离子水或蒸馏水。
3. 试剂准备
包被缓冲液()
将试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末小心倒入100ml无离子水中溶解即可。4℃存放,1月内有效。
洗涤液(PBST)
将本试剂盒配备的25倍浓缩PBST液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。(如果PH降低,)
底物溶液
取1片柠檬酸-磷酸盐片剂(试剂盒配备)溶于100ml无离子水中,溶解后,取50ml溶液,再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装(5ml\瓶或10ml\瓶),避光-20℃保存。用前避光溶化,临用时每1ml上述溶液加10ul3%的双氧水(H2O2)。务必加双氧水!
4. 操作步骤
用包被缓冲液稀释A型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000),在ELISA板上每孔加50ul,振荡,封板或置湿盒内,室温过夜。
抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。
图1 96孔酶标板检测10份样品布局图
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
D
E
F
G
H
S11:8
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
+1:32
—1:4
1:16
1:64
1:8
1:32
1:128
1:64
1:256
1:128
1:512
病毒抗原对照
1:256
1:1024
1:512
1:2048
1:1024
1:4096
图1为抗体滴度测定(定量)检测10份样品布局图;图2为抗体滴度测定(定量)检测20份样品布局图。
作业指导书
第二章

口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA
作业指导书
SQSYK-ZYB-004-
第一版第0次修改起草人:
2011年04月日颁布、实施
图2 96孔酶标板检测20份样品布局图
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
D
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G
H
S11:32
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
+1:32
—1:4
1:64
1:64
1:8
1:128
1:128
1:256
1:256
S111:32
S12
S13
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S16
S17
S18
S19
S20
1:512
病毒抗原对照
1:64
1:1024
1:128
1: