文档介绍：苏州大学
硕士学位论文
OX40转基因细胞的构建及鼠抗人OX40激发型单克隆抗体的研制
姓名:孙建军
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:张学光
20040401
转基因细胞及鼠抗人激发型单克隆抗体的研制..茎基璧塑篓墨堕燕垒旦鬯寐⒕ダ既刀楸に芤钏堋@悸皴及掺阕售号促进袋发中心酌形袋。維愿饕T陲瓮靡哂﹃么鹱髦啵审文接要欠肿拥俏稩鹫跨貘糖蛋鑫,藕超家族残曼,主要袭达予活他的耠硐珻表瑟瞧毒少量袭达,磐;激活的和肝海恕⑹笱拙凡课或菴缨魄,成人喊膛倘鞮细胞,人【病毒感染的建株赴鸋蚆1嗦肴薕幕蛭于,长约,编码霭被帷F渑涮錙为骷族成员,分子量为腎涂缒ぬ堑按选H薕主要表达予成熟的树突敬细胞、活化纳赴⒀9苣谔迪赴、脐带静脉血管内皮细胞羓、巨蠛缅施敛及莱些组织器官包括心、膏骼肌、睾丸和肺等。/介导豹共裁激信号,;参与了崾┑幕钅堋⒃鲋骋魄ㄒ疲諸缁胞的长期生成,藤/藕旁诿卮蚊庖甙揪悠冢瓮靡哂Υ鸺笆芤呒且湄梅⒒喻咭1分化成熟;在内皮细胞上,嫦蛄藕拍苌系鞅泶锴骰蜃覴疌由于主要寝达襁炎瘢部位的抗原特异性赴希蛊涑晌R桓隼硐氲拿庖干预的靶分子,肖望通过夜体内阻断“疧的相瓤作用或消除细胞来减弱自身免疫性疾病及移植排斥反应,而应用激发型抗的单抗来增强篱号、促进细胞稠子的分泌和增加抗原特异性记忆细胞的数爨,从而提高机体抗胂薕静壳鏊获转基因维臆瀚构建。本研究通过方法,从亏跄谊錞缨腿敕慧@┰龌竦帽辔鲍片段,通过基因党隆技术,将其援入炱核袭达载体。=徊藉员躭蓦震落转絷装术将此重组表达载体母入小鼠成绎缎细胞中,抗饯簿选获礴毙稳定表达太调节效应。同时鼓芙榈寄嫫鸸泊碳も魏牛蓐貱奘坌酚掌〥徽臻靛熊力。Ⅷ!!#鯻——瘛!猒—馹!!猒,。’。。!!猒””’—’—’。’’———————一
免疫荧光标记分析表明,腹水型单抗的效价为蛞陨希炕罂固宓鞍子糜的转基因细胞.。经体外长期传代和液氮反复冻存复苏,转基因细甃甇;蛳赴訢拇俜只饔谩向共刺激信号,促进的分化成熟。,并经多次克隆化培养,最终获得瓿中⑽榷ǚ置谑罂谷薕タ寺】固宓脑咏涣鱿赴辏直鹈>逋饬ù代嘌旱6炒姘肽旰蟾此眨陨ち己茫榷ǚタ纳痛炕采用本室建立的小鼠体内诱生腹水方案诱生腹水,腹水形成的阳性率为%,腹水的产量平均为恍∈蟆8顾拇炕ü齈亲和层析法实现。腹水型单抗经纯化后,单抗蛋白含量在~/之间。经タ侗鹞坏阊芯俊通过与抗寺『臕木赫种剖匝椋タ耆ú荒茏瓒螼瓼タ褂タ筎曰罨腡细胞促增殖作用及细胞因子分泌的影响。外周血,通过常规的密度梯度分离法,获得,再通过绵羊红细胞环形成试验,获得纯度较高的赴粜月ヒ陨。经过激发型鼠抗人胞生长良好,的表达稳定在%以上。据文献报道,芙榈寄转基因细胞对的刺激作用。按照本科室建立的诱导方案,,添加可溶性⒂隠甇灿后,流式细胞术检测到、、进一步上调表达。为免疫原,免疫/∈螅捎肂淋巴细胞融合技术,将免疫后小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,以此转基因细胞以及罨腡细胞作为阳性筛选细胞,,经和>焖俣ㄐ允灾椒ǚ治黾ǎ腎啾鹞狪,而蛭泌抗体。,提示该单抗与上述商品化的单抗识别不同的抗原位点。取正常人新鲜×赴转基因细胞及鼠抗人激发型单克隆抗体的研制摘要Ⅱ
虲タ勾碳螅尤タ辜绦嘌⑾指玫タ鼓芄幻飨源此单抗属于激发型的单克隆抗体,对体外扩增活化的赴哂泻苊飨缘淖综上所述,本研究成功克隆了编码人分子的片断,构建了能稳定表达人分子的转基因细胞,初步探讨了该转基因细胞对的促分化作用,证明了表达在表面的肿幽芙榈寄嫦蚬泊碳ば藕牛撼晒ρ兄瞥瞿芪榷和特异分泌抗人し⑿偷タ寺】固宓脑咏涣鱿赴辏醪教教至烁玫タ苟曰偈蛊湎騎方向分化。硕士研究生:孙建军进活化的赴徊皆鲋倍系鞅泶颕和猋,下调R用,并且能促使赴騎方向分化,在肿瘤免疫治疗中具有潜在的临床应用价值,值得进一步深入研究。化赴拇碳ぷ饔茫っ鞲玫タ乖谔逋饪山徊嚼┰龌罨腡细胞,这可能是通过上调表达鹱饔谩2⑶腋玫タ鼓艽俳鳷细胞上调表达甕,下调表达关键词:;旱タ寺】固澹换蜃H荆荒嫦蛐藕牛籇籘细胞师:张学光导●●—!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!猒————————————●—————————————!!!!!!!!!!!R转基因细胞及鼠抗人激发型单克隆抗体的研制摘要
竺壁兰里塑些墨堕垫查旦兰竺塑垄型苎垄堕垫竺竺里型一———————————里甌Ⅳ痮琣,,,·疌產珻,.琣.,./,./琣.,.甇瓸,,
岫甌—,..‘.,.瓻琻.