文档介绍：复旦大学
博士学位论文
TIE2配体寡肽的设计、筛选及其在基因治疗中的靶向导入作用
姓名:吴向华
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:顾健人
20040426
在基因治疗中的靶向导入作用配体寡肽的设计、筛选及其中文摘要第一部分配体寡肽的设计与筛选这是基冈治疗至今尚未成为临床常规治疗措施的关键因素之。。因此研发~种高效靶盼陛检验其何效性,为今后肿瘤的基因治疗提供可靠的理沦依据与实践指导。胞为筛选靶,用噬菌体展示随机肽库避行筛选。经过稚秆〉氖删澹庑颉、复旦人学医学院顾健人教授上海市肿痛研究所肿瘤基因治疗将成为除手术、放疗和化疗等方法外又‘新的抗癌策略。尤其在抗肿瘤转移和复发方面将起重要作用。目前还缺乏将基因导入人体细胞的高效靶向性载体系统,基冈导入系统成为当务之急。本研究旨在建立一种靶向受体的非病毒摹因导入系统并【目的】掌握特定受体的配体寡肽的设计与筛选方法;获得受体的候选配体寡敝;【方法】τ没赥芴逄烊慌涮錋的同源序列比较/二级结构分析及秆阴性表达细胞株;⒆H綯泶镆跣韵赴珿秆稳定表达细胞系;分别以重组人融合蛋白猅疐与稳定表达受体的细免疫组化及噬菌体回收试验鉴定出高度富集的阳性噬葡体克隆;然后化学合成高亲和力阳;筛选到阴性表达细胞株;建立了倍ū泶锵赴礢籈灰詒猅疐隨为筛选靶获得的高亲和力富集噬菌体展示肽序列羧基端各加一个酪氨酸后分别命名为博十研究生:吴向华疏水性分析方法没计受体的配体寡肽并化学合成;蚖性噬菌体克隆展示肽。【结果】基于受体的配体设计的肽命名为导师:配体寡肽的设计、筛选及其在基因治疗中的靶向导入作用
在体内及体外特异性结合试验虶基因导入系统的构建及其转导报告基因的体外与体内靶向导入试验第二部分和隩第三部分!窘崧邸勘狙芯渴褂玫纳杓萍吧秆方法。、苁腔竦檬芴宓呐涮骞央牡囊恢挚尚型揪叮汉蜓〉呐涮骞央男枰=ú㎎和赫吕础!窘崧邸縂和茉谔逋夂吞迥谟隩匾煨越岷希⒕【关键词】,促血管生成素删逭故荆涮骞央【目的】检测和隩谔迥诤吞逋馓匾煨越岷夏芰Γ弧痉椒ā俊昙,然后分别在细胞裸鼠种植瘤中进行体外、体内结合试验,采用竞争法检测结合特异性。【结果】”’..ǎ弧薄疘甪存肺腺癌瓵赴闶笾种擦鲋蟹植急壤谖簿猜鲎⑸。隩芴褰岷狭Φ筒⑶也槐痪赫砸种疲藿岷献ㄒ恍浴【关键词】碘缀统J【目的】构建虶基因导入系统并检测其转运基因的靶向性。【方法】用双功能交联剂分别将配体寡肽虶与涣P纬晒布鄹春衔铮缓蟀ǜ婊因进行体外和体内靶向性导入试验。在体外试验中,籔/平【『籔/分别导入表达阳性的肺癌细胞与表达阴性的肝癌细胞。小时后,检测活惮。体内导入试验在狝赴闶笾种擦瞿P徒衦分别将甈/一虶一痆甮复合物进行痛周注射,同叫设立痆籫组为划照。小时后牺牲裸鼠,取出心,肝,脾,肺,肾和瘤体,慈危潭ǎ琗—旧ā!窘果】籔/和甈/组的活性在狝赴忻飨愿细胞及表达阳性的肺腺癌狝和”/,;配体寡肽的设计、筛选及其在基因治疗中的靶向导入作用中文摘要
虻既胂低匙5紁基因的体内靶向性基因治疗试验第四部分细胞,T谥种擦鲋泻羌隙嗬度鞠赴模危ⅲ鲎橹屑负醪患豁染强巾支气管粘膜除外;【结论】虶基因导入系统在体外和体内均能有效地将【关键词虻既胂低常珿基因导入系统,基圆,猤基囚【目的】检测虶基因导入系统转导实奶迥诎邢蛐曰蛑瘟菩Ч;冈治疗的临床应用提供实验依据。【方法】该实验采用芰浯菩月闶/。人肺癌狝种擦鼋又钟诼闶笃は拢敝琢鲋本洞,;一痯;一痯后当对照组肿瘤出现坏死时,牺社裸鼠,取出瘤体用组织纸吸净『粘浦亍8莨式计算瘤体积。【结果】肿瘤生苡忻飨砸种谱饔。抑瘤率分别为.%,.%;【结论】虶【关键词】基冈治疗,拟告基因导入到表达阳性肿瘤细胞。;翰捎昧鲋茏⑸浞绞剑袅教煲淮危看沃瘟朴胮玴基因与对照组比较,籔/蚐一痯治疗组对基因导入系统转导蚰芟灾种浦琢錾ぁ配体寡肽的设计、筛选及其在基因治疗中白勺靶向导中文摘要
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———可丽隼隼鯢雨祗—一日取得了很大进展,但仍不能从根本上治愈恶性肿瘤。随着现代分子生物学及其桐关学科的抗肿瘤转移和复发方面将起重要作