文档介绍：超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白
和低密度脂蛋白胆固醇:一种候选参考方法
董军国汉邦陈文祥
卫生部老年医学研究所
HDL-C降低和LDL-C升高,是明确的心血管病独立危险因素
心血管病防治工作需要准确的HDL-C和LDL-C测定结果
建立和保证HDL-C和LDL-C常规测定结果的准确性需要可靠的参考方法
HDL-C 和LDL-C准确测定必要性
美国疾病控制与预防中心(CDC) 定量法
D= 超速离心分离极低密度脂蛋白(VLDL),
制备底部组分(BF)( 包括IDL, LDL, HDL和Lp(a)等)
用肝素-锰离子试剂沉淀BF中的脂蛋白,制备HDL组分
分别用AK胆固醇参考方法测定BF 胆固醇(BFC)和HDLC,
自BFC中减去HDLC得LDL-C (包括IDL和Lp(a))
样品量大(5 mL),其应用受到可得样品量限制
LDL和HDL的分离采用化学沉淀法,影响因素较多
样品制备需多部手工容量操作,费时,技术要求高
受超速离心转头品种的限制,每次分析最多18 个样品
由于脂蛋白的不稳定性,样品制备过程(约需24-28小时)
本身造成HDL-C和LDL-C的变化
-定量法存在的问题
血清脂蛋白胆固醇的体外再分布
超速离心法: 各类脂蛋白的定义方法,在分析化学上可能
也是最可靠的脂蛋白分离方法,是一种物理分离方法,
影响因素最少。
电泳法: 很难用于精密脂蛋白分析。
沉淀法: 沉淀剂和沉淀条件多种多样,影响因素多,
较难实现一致的特异性。
脂蛋白的分离方法
超速离心中的定量操作困难、繁琐,样品量大
部分Lp(a)在HDL密度范围内,造成HDL测定偏差
超速离心法(结合精密胆固醇分析) 参考方法
血清脂蛋白的密度分布
LDL
HDL
VLDL
Lp(a)
Lp(a)是二硫键连接的LDL-apo(a)复和体,还原剂
可使Lp(a)解离为LDL[Lp(a-)]和apo(a).
Lp(a-)密度与LDL相近,或略小于LDL.
若能建立条件,使Lp(a)解离,又不改变HDL的密度
性质,则可实现HDL的超速离心分离.
Lp(a) LDL-apo(a)复合体
不同密度下ME对超速离心BFC的影响