文档介绍：质粒DNA的提取、纯化、酶切、电泳、紫外分光光度法定量测定
朱文博
中山医学院
基因克隆示意图
分、切
接
转
筛
基因工程
定义:
实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为重组DNA技术,又称重组DNA技术。
基因载体
基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)柯斯质粒。这些载体均需经人工构建,除去致病基因,并赋予一些新的功能,如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。
实验内容
(P83)
:DNA的琼脂糖凝胶电泳(P28)
:DNA的紫外分光光度法测定(P37)
(P70碱法)
实验目的
掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用;
掌握核酸内切酶切割质粒的原理并学会运用内切酶
掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳的原理和步骤;
掌握紫外分光光度计对DNA含量的测定方法。

1 关于质粒的概念
(plasmid)?
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质粒的定义
质粒是细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子,能稳定地独立存在于染色体外,并传递到子代,一般不整合到宿主染色体上。
在细胞内它们常以共价闭环的超螺旋形式存在。
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(1) 超螺旋DNA (supercoiled DNA, SC DNA)
质粒的三种构型
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(2) 开环DNA (open circular DNA, OC DNA)
如果两条链中有一条的一处或多处断裂,分子就能发生旋转而消除链的张力,形成松弛型的环状分子。
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