文档介绍：第七章蛋白质的分离、纯化和表征
一、蛋白质的酸碱性质
蛋白质是两性电解质
可解离基团:-氨基, -羧基,侧链R基团
蛋白质等电点:在某一pH值,蛋白所带正负电荷相等,即净电荷为零时溶液的pH称为该蛋白等电点。
二、蛋白质分子大小与形状
(一)根据化学组成测定最低分子量
例:%,其最小分子量是多少?%。试求其分子量。
解:肌红蛋白的分子量为:
100:=M:56
M=100*56/=
血红蛋白的分子量为:
100:=M:(456) M=
(二)几种测定蛋白分子量方法
1、渗透压法:=cRT/Mr
2、测定扩散系数法:随Mr增加而降低
3、沉降法
规定10-13秒为一个单位,称为沉降系数单位,用S表示。
*4、凝胶过滤法
**5、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法
凝胶过滤法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定蛋白质分子量
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
测定蛋白分子量
测定蛋白标准蛋白
logMr=K1-K2R
三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀
1、蛋白质溶液是一种胶体溶液;
水化作用,双电层结构
2、蛋白质沉淀
(1)盐析:加入中性盐,破坏蛋白水化层引起沉淀
(2)有机溶剂沉淀:加入极性有机溶剂,脱水化层,破坏双电层
(3)重金属盐沉淀:结合成不溶性盐
(4)加热变性
四、蛋白质分离纯化的基本原则
1、选择好的材料
2、前处理:匀浆或捣碎等
3、粗分离:盐析,有机溶剂沉等
4、细分离:凝胶过滤,离子交换等
蛋白质分离纯化的几个基本原则
五、蛋白质的分离纯化方法
(一)根据分子大小不同:
1、透析:利用蛋白质分子不能透过半透膜,使蛋白质和其他小分子分开。
2、凝胶过滤:利用蛋白质分子大小不同将蛋白分开。
凝胶过滤的工作原理
也叫分子筛层析
分子筛层析的工作原理
(二)根据溶解度差别:
1、等电点沉淀法:等电点时蛋白质溶解度最低,不同蛋白具有不同等电点。
2、盐析法
3、有机溶剂法