文档介绍：薄层分析、酶抑制技术和荧光技术
薄层分析、酶抑制技术和荧光技术都是基于薄层展开后用不同的现色方法进行显色分析的技术。其中薄层的制备、展开和显色技术是该分析方法的基础。
薄层技术
薄层色谱法是把固定相(活性吸附剂或键合剂)均匀的铺在一块平整的板上,制成薄板。。与纸上色谱法一样,点样经展开剂展开。
特点:操作简单、效果比纸上色谱法要好。
显色后斑点集中并且可以定量分析(与薄层扫描仪配套)。
试样量少,几微克到几百微克。
可以为高效液相色谱选择合适的固定相。
近代薄层色谱发展的类别简介
薄层板法(略)
圆筒色谱(管状色谱)法将固定相涂渍在管的外壁上,可以减少横向扩散,宜于制备色谱用。
如果为小孔径管就为色谱棒。
锥形薄层色谱法将薄层板制作成
倒圆锥体。展开时可以使溶剂前沿
扩大,展开剂向前沿扩散时形成速度梯度,结果抵消了谱带扩展,使试样再度浓缩。
径向薄层色谱法
两种类型:一种与圆形纸上色谱方法相似,;另一种是将普通薄层板点样处固定相刮去,使展开剂只能通过点样处狭窄部分向前方弧形展开。
连续展开法
在密闭槽中进行上行展开,
展开剂移动一定距离后即终了。
顶板蒸发展开
用盖带有槽孔的展开槽,使部分薄层板露出槽外。展开时,槽里的展开剂不能蒸发,当上升到槽外时就蒸发。这种展开法能够缩短展开剂移动满的斑点之间的距离,不能够提高分离效能。
开口槽展开法
薄层板在没有上盖的展开槽中展开。展开过程中展开剂随时可以蒸发。越往上蒸发越快。当展开剂到达一定高度时,上行展开剂与蒸发展开剂速率相等,此时形成了负的速度梯度,提高了移动慢的组分的分离度,而降低了移动快的组分的分离度。
热板展开法
在薄层板的背面用热块加热。在高分离度区域加热,形成溶剂速度梯度和溶剂极性梯度,从而改善分离度并可使斑点高度浓缩,提高痕量组分的检测灵敏度。
连续展开是分离结构相似的多组分的有效方法。为了防止蒸发时色谱条件受槽外条件影响和展开剂污染空气,可以用在薄板顶端加吸附剂(多层滤纸)吸附展开剂的方法。
梯度展开法与双向展开法
梯度展开法
展开过程中不断按照一定比例改变展开剂中溶剂的组成。
这种方法有时能够提高分离效果,特别是反相薄层色谱中常用。
双向展开法
将试样点在薄层板的一角,先沿一个方向展开。取出薄层板,干燥后旋转90 o,然后再用同一种展开剂或换另一种展开剂沿另一方向展开。使前一次展开后的重叠斑点得以分离。
双向展开法特点
双向展开法还可以用以检测对光、热、酸、碱不稳定的组分。试样斑点经第一次展开后用光照或加热或用酸碱处理,旋转90 o,再用相同的展开剂在相同条件下展开,凡是在对角线上的斑点都是稳定的,凡是不在对角线上的点都是分解产物或反应产物。
多次展开法
试样经一次展开不能的到很好的分离结果时,是薄层板上的溶剂挥发后重新用展开剂展开。如此反复多次,直到有满意分离结果为止。
单向或双向多次展开
同一种展开剂单向或双向多次展开,反复展开时由于后沿比前沿移动快,可以使散开的斑点合拢,提高检测灵敏度。用两种或两种以上不同的展开剂分别进行多次展开,可以将不同的的组分分开,称为阶梯式展开或多极展开。