文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
XAF1基因沉默在结直肠肿瘤中的实验研究
姓名:马天乐
申请学位级别:博士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:江石湖
20041101
基因沉默在结直肠肿瘤中的实验研究中文摘要界的热点研魔对象。由于结直肠肿疯的发生发展具有多基因轰步骤的渐进累积性特⑷ヒ阴;敢种萍对细胞株进行处理,观察药物对表达的【背景】结直肠肿瘤发病率在欧美以及我国的逐年上升使其再度成为近年来学点,故而为肿瘤检测和治疗思路的开拓提供了极大的空间。谤导凋亡是目前肿瘤治疗领域内探索较多的方向之一,而凋亡抑制蛋白家族,质瞧渲械娜鹊恪喙匾蜃產荌易宄稍币灰粁染色体相关凋亡抑制蛋白用,俸内,外研究发现,在许多肿瘤细胞株以及胃癌、非小细胞性肺癌、神经系统肿瘤等组织中表达水平低下甚至表达缺失。但是有美在结直硒肿瘸中的表达,尤其是体内研究目前还鲜见报道;此外,基因沉默的具体机制尚未阐明。』目的狙芯康哪康闹荚冢觳鈞诮岢Π┫赴暌约敖岢Π┗者体内的表达情况,初步探索引起基因沉默的机制;动子区域的刈橹柿#=窈蟮慕徊窖芯孔骰∽急福、虲等传统肿瘤标记物的综合分析,探讨作为一种新的肿瘤标记物的潜在临床应用价值;鄄鈖基因、相关基固以及三者两两之间表达的相互关系。【对象与方法逋庋芯慷韵笱∪在细胞株内的表达情况,继而用谆R泼敢种萍—、等鼋岢Π┫赴杲刑逋庾H荆鄄熳H厩昂笙赴赬达水平的变化。体内研究对象包括例原发性结直肠癌、例结直肠良性肿瘤以及例正常对照,、琗的负调节蛋白,能够抑制的抗凋亡作菇òɑ蚱个结肠癌细胞株,首先用,椒ḿ觳影响。构建刈橹柿#τ弥侍遄H痉ǘ訡ü与汉5诙拼笱揠ā侣畚
.。、.、—四指标性肿瘤组中/的比值显著高于良性肿瘤纽.。【结论的在体组织表述,井比较全部韵笸庵苎V蠧和水平在各组间的表达差异及其对结直肠肿瘤良、恶性判断的临床应用价值。【结果逋庋芯拷峁允荆诒狙芯克∪〉个结肠癌细胞株中,、腦喽员泶锼较灾陀贑瓺饔∈焙螅飨赴甑腦泶锼骄胁煌潭鹊奶岣撸赴晟系髯用更为显著;单独用砗骕泶镂醇飨员浠涣:嫌靡┡Φ表达升高与单用啾任廾飨圆钜臁0蚱舳枨表述依次逐渐升高,三组之间存在非常显著的统计学差异..。表达水平的高低与患者年龄、性别以及肿瘤位置等务鞍之联合方案铰之单用或者.、一三指标联合方案可显著提高结直肠恶性肿瘤的诊断率.。,与湮A礁龌蛭点相邻的抑癌基因,但其在肿瘤组织的表达上无明显相关性.:恶达水平在肿瘤患者中显著低于正常人,并且具有良、恶性判断价值。此外,联合外周血表达水平的检测也有助于提高恶性肿瘤的检出率。因此,无论对临床诊断价值还是肿瘤治疗而言,都是一个具有潜在应用价值的靶基因。【关键词嶂背χ琢觯琗虺聊呒谆琢霰昙俏<尤’一其中表达水平相对更为低下的一重组质粒转染可显著提高在细胞株中的表达水平。,恶性肿瘤组、,通过转染包舍基因启动子区的一重组质粒可部分逆转基因沉默。组织Ⅺ~表果显示,.,..6哉兆樵蛭..Φ和、和沓了柙椭濒杈叉椭许宦鼐
鸄琒谢·:篢琓,~,;5诙芸浦醚痝:畚‘;篊/甌琲瓻.—.,.—猧\,、
脚瓻.,.甋—.∽.瓹.,.,...,,瑆,.瑃篢瓵.—.】琯,現,;/篟基铀沉默在撼直萌舯蝗串瞬袅验硼究一—‘.,
生堡星.:堡型:胕丝矿蚶妓寇篹琗琯,,.
细胞的凋亡过程吐迄今发现的鯨妤易宄稍敝校嫠蚝蛒引言统计,年欧洲结直肠癌的发病人数高达朔伟┖腿橄侔龃于肾癌而高居癌症发病率的第二位。美国癌症协会年碌谋ǜ嬷谐疲ぜ全美年结直肠癌新发病例数将高达,凰烙诟貌〉幕颊呷耸傻呔影┲⑺劳銎椎牡诙淮ā6谥泄孀啪梅⒄购蜕钏降娜找嫣高,由于生活方式和饮食结构改变等诸多因素的影响,结直肠癌的发病率莅近年的时间内亦呈迅速上升趋势,已成为我国紧随肺癌之后的第二大高发癌症。值得庆幸的是,有超过%酗嶂背Π┗颊叽恿夹息肉和/或腺瘤荼湮6裥缘墓程长迭辏饩臀T缙谡锒虾椭瘟铺峁┝艘桓霰蟮拇翱谄凇R虼耍嶂肠癌近年来再度成为研究的热点。结直肠肿瘤的发生发展是一个多基因参与、多步骤麦错影响的复杂渐进过程。但无幸色滞揪兜贾碌南赴瘛生转化,最终肿瘤的发生都是细胞增殖过程与细胞凋亡过程之问调节失衡的结果。因此,在各条途径殊途同归的环节上采取干预措施是比较理想的肿瘤治疗手段内之一,其中诱导凋亡就是近年来探索较多的领域。,且焕喟┗颍浔嗦氩生的蛋白质可以通过直接连接并抑制⒆魑猚的作用底物等方式抑制基因是其中研究较为详尽的两个。相美因子—邻,其所编码的蛋白质大小约,其中舍有鲂恐富方峁筟。具有拮抗凋亡抑制作用的效应,能够激活⒂盏嫉蛲龅姆⑸5